[发明专利]一种穿心莲的组织培养方法

权利要求书

1.一种穿心莲的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1外植体处理：采集无菌的穿心莲完整腋芽作为外植体，消毒杀菌之后用无菌水冲洗，随后自然风干，备用；

S2愈伤组织培养：在无菌环境下，将腋芽放入愈伤组织培养基中培养，首先暗培养，随后光培养，获得愈伤组织；

S3诱芽培养：无菌环境下，在愈伤组织培养基中以23-25℃的温度、3200-3400 lux的光照强度培养7-10天；

S4增殖培养：将S3中诱芽培养中获得的幼芽转入到继代增殖培养基中继续培养，培养环境为：温度23-25℃，光照强度3200-3500 lux，光照时间为10-12 h/天，培养时间为10-15天，待无根苗的叶片颜色开始变化时结束；

S5生根培养：转到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度21-25℃，光照强度4500-6000 lux，培养3-5天，待98-100%的幼苗根长2 mm时结束；

S6炼苗：将生根后的幼苗连同纸环一起放在种植绵上，将种植棉放在育苗盘里，同时育苗盘里放上5-10 mm的营养液，定期补水，在温度25 ℃下暗培养3-5天，随后在22-25℃的温度、8000-15000 lux的光强下光培养15-20天；

其中：所述生根培养基配方为：1/3MS+0.1-0.12 mg/L的NAA+0.08-0.12 mg/L的BR₁+0.06-0.08 mg/L的青霉素+20 g/L的蔗糖+6.5g/L的琼脂，pH5.8-6.0；

所述愈伤组织培养基的配方为：MS+0.12-0.16 mg/L的BR₅+1.8-2.0 mg/L的IBA+0.08-0.10 mg/L的青霉素+16 g/L的蔗糖+6 g/L的琼脂，pH5.8-6.0；所述的继代增殖培养基配方为：MS+0.12-0.16 mg/L的BR₅+0.1-0.14 mg/L的NAA+0.08-0.10 mg/L的青霉素+16 g/L的蔗糖+6 g/L的琼脂，pH5.8-6.0。

2.根据权利要求1所述的一种穿心莲的组织培养方法，其特征在于，炼苗时营养液的配方为：硝酸钙200-250 mg/L、硝酸钾250-300 mg/L、黄腐酸钾200-250 mg/L、硫酸镁160-200mg/L、硫酸锌30-60 mg/L、硫酸锰20-30mg/L、磷酸二氢钾80-90 mg/L、硫酸铜1-3 mg/L、NaFeEDTA 3-5 mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种穿心莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为：在无菌环境下，将腋芽放入愈伤组织培养基中，在25±1℃的温度下暗培养3-5天，随后在22-25℃的温度、800-1200 lux的光强下光培养7-10天。

4.根据权利要求1所述的一种穿心莲的组织培养方法，其特征在于，所述诱芽培养和增殖培养的过程中保证培养环境中的湿度为65-85%。

5.根据权利要求1所述的一种穿心莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤S1中的消毒杀菌的步骤为：将采集得到的外植体，用75%的酒精消毒30 s，随后用30 ppm的次氯酸浸泡8 min，然后用无菌水冲洗3次即可。