[发明专利]一种穿心莲的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种穿心莲的组织培养方法，包括以下步骤：S1外植体处理：采集穿心莲完整腋芽作为外植体，消毒杀菌备用；S2愈伤组织培养：将腋芽放入愈伤组织培养基中，首先暗培养，随后光培养；S3诱芽培养：光培养7‑10天即可；4增殖培养：将获得的幼芽转入继代增殖培养基中继续光培养；S5生根培养：转到生根培养基上光培养3‑5天；S6炼苗：将生根后的幼苗放在营养液内，光培养15‑20天；其中：所述生根培养基配方为：1/3MS：+0.1‑0.12 mg/L的NAA、+0.08‑0.12 mg/L的BR₁、+0.06‑0.08 mg/L的青霉素、+20 g/L的蔗糖和+6.5g/L的琼脂，pH5.8‑6.0。本发明的培养方法具有使得穿心莲植物组织培养的发芽率、生根率以及成活率高的优点。

技术领域

本发明涉及中草药培养的技术领域，更具体地说，它涉及一种穿心莲的组织培养方法。

背景技术

穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees)，是一年生草本植物，属于药用植物，有清热解毒、消炎、消肿止痛作用。穿心莲喜高温湿润气候，喜阳光充足、喜肥。种子发芽和幼苗生长期适温为25-30℃，气温下降到15-20℃时生长缓慢，气温降至8℃左右，生长停滞；遇0℃左右低温或霜冻，植株全部枯萎。以肥沃、疏松、排水良好的酸性和中性砂壤土栽培为宜，pH8.0的碱性土仍能正常生长。传统穿心莲要长5-6月，育苗时间长，生长周期长。

穿心莲传统的育种方法是以种子播种繁殖，由于种子皮硬，因此发芽所需时间较长，且出苗参差不齐。利用植物组织培养技术进行繁殖，可以克服传统的繁殖缺点。目前对于植物组织培养中，常以MS培养基为基础培养基并添加相应的植物激素来进行种子萌发诱导、愈伤组织培养、诱芽培养以及生根培养等，使得获得更高的发芽率、生根率以及存活率。

对于植物激素的选择，目前用于穿心莲组织培养最多的是6-苯甲基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)、萘乙酸(1-naphthylacetic acid，NAA)、吲哚丁酸(IBA)、激动素(KT)、2，4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D)。但是在将上述的植物激素用于穿心莲的植物组织培养时，最终诱导发芽率为60-85％，移栽后成活率仅为45-86％，相对较低。

因此开展高发芽率、生根率、成活率以及短周期的培育方法研究是十分必要的，也是市场的迫切需求。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种穿心莲的组织培养方法，其具有使得穿心莲植物组织培养的发芽率、生根率以及成活率高的优点。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种穿心莲的组织培养方法，包括以下步骤：

S1外植体处理：采集无菌的穿心莲完整腋芽作为外植体，消毒杀菌之后用无菌水冲洗，随后自然风干，备用；

S2愈伤组织培养：在无菌环境下，将腋芽放入愈伤组织培养基中培养，首先暗培养，随后光培养，获得愈伤组织；

S3诱芽培养：无菌环境下，在愈伤组织培养基中以23-25℃的温度、3200-3400lux的光照强度培养7-10天；

S4增殖培养：将S3中诱芽培养中获得的幼芽转入到继代增殖培养基中继续培养，培养环境为：温度23-25℃，光照强度3200-3500lux，光照时间为10-12h/天，培养时间为10-15天，待无根苗的叶片颜色开始变化时结束；

S5生根培养：转到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度21-25℃，光照强度4500-6000lux，培养3-5天，待98-100％的幼苗根长2mm时结束；