[发明专利]一种卵母细胞冷冻保存液及保存方法

权利要求书

1.一种卵母细胞冷冻保存方法，其特征在于，卵母细胞冷冻保存液包括一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2.5%乙二醇、1.25%二甲基亚砜、1.75%丙二醇，上述百分数均为体积百分比；

所述平衡液二包括基础液、7.5%乙二醇、3.75%二甲基亚砜、3.75%丙二醇、10μM染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；

所述玻璃化液包括基础液、15%乙二醇、7.5%二甲基亚砜、7.5%丙二醇、0.5M蔗糖、10μΜ染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；

所述基础液为含有质量分数20%SPS的基础试剂，所述基础试剂为Earle's平衡盐溶液；

所述卵母细胞冷冻保存方法采用浓度递进法进行冷冻，包括以下步骤：

把卵母细胞冷冻保存液从冰箱中取出恢复至室温，室温下平衡20分钟以上，在培养皿中做成0.5ml的小滴，把需要冷冻的2-4枚卵母细胞转移至基础液中放置1min，转移至平衡液一中放置1-2分钟，随后转移至平衡液二中放置6-8分钟，然后将卵母细胞移至玻璃化液中放置30-60秒，转移至标记好的Cryotop载杆上，投入液氮中，液氮中套Cryotop外管，转移至液氮罐中保存。