[发明专利]重组果胶酶及其基因、重组载体、制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组果胶酶，其特征在于，所述重组果胶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种编码如权利要求1所述重组果胶酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种重组载体，其特征在于，为含有权利要求2所述的重组果胶酶基因的pGAPZα载体。

4.一种重组果胶酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列重组构建到pGAPZα载体中，然后转化到毕赤酵母宿主菌中，再利用Zeocin筛选高表达重组果胶酶的转化子；

步骤二、将转化子在生物反应器中进行高密度发酵，所得到的上清液中即含有重组果胶酶蛋白。

5.根据权利要求4所述的重组果胶酶的制备方法，其特征在于，还包括步骤三、蛋白纯化：用镍亲合层析柱对步骤二得到的上清液进行纯：先用平衡缓冲液平衡层析柱，再将上清液过柱，用含30 mM咪唑的pH 7.4缓冲液预洗柱子，然后用含200 mM咪唑的pH 7.4 缓冲液溶液将融合蛋白洗脱下来即可。

6.根据权利要求4所述的重组果胶酶的制备方法，其特征在于，所述高密度发酵为将所述高表达重组果胶酶的转化子用YPG培养基培养至OD₆₀₀为10~15作为种子菌，将种子菌按1：10的比例接种到含有无机盐培养基的发酵罐中；在28℃继续诱导培养72-96小时并补加70%的甘油作为碳源；利用浓氨水来调节pH为4.0。

7.一种权利要求1所述的重组果胶酶的用途，其特征在于，所述重组果胶酶的用途为提高果汁产量、构建重组细胞或构建试剂盒。