[发明专利]一种HPLC法分离测定盐酸左西替利嗪及其基因毒性杂质E的方法

权利要求书

1.从盐酸左西替利嗪原料中分离基因毒性杂质E的方法，其特征在于，用填充有十八烷基键合硅胶的高效液相色谱柱作为固定相，以磷酸二氢钾缓冲盐、乙腈的混合溶液作为流动相将基因毒性杂质E分离，所述基因毒性杂质E为2-（2-氯乙氧基）乙酸，结构式如下式II：

；

所述磷酸二氢钾缓冲盐和所述乙腈的体积比为95:5，所述磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为0.01mol/L-0.03mol/L，所述流动相的pH值为2-4。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8-1.2ml/min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，分离时间为≤60分钟。

4.鉴定盐酸左西替利嗪中基因毒性杂质E的方法，其特征在于，高效液相检测器的波长为200-220nm，若在保留时间为7.400±0.05分时出峰，则判定为含有所述基因毒性杂质E；用填充有十八烷基键合硅胶的高效液相色谱柱作为固定相，以磷酸二氢钾缓冲盐、乙腈的混合溶液作为流动相；所述磷酸二氢钾缓冲盐和所述乙腈的体积比为95:5，所述磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为0.02mol/L，所述流动相的pH值为3.0±0.1；所述高效液相色谱柱的规格为250×4.6 mm，5µm；流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃；所述基因毒性杂质E结构式如下式II：

。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，若在保留时间为17.793±0.05出峰，则判定为含有盐酸左西替利嗪。

6.检测盐酸左西替利嗪中基因毒性杂质E的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

A 分离

用填充有十八烷基键合硅胶的高效液相色谱柱作为固定相，以磷酸二氢钾缓冲盐、乙腈的混合溶液作为流动相将基因毒性杂质E分离，所述基因毒性杂质E为2-（2-氯乙氧基）乙酸，结构式如下式II：

；

B 检测

将高效液相检测器的波长为200-220nm，若在保留时间为7.400±0.05分时出峰，则判定为含有所述基因毒性杂质E；

C 计算含量

求所述基因毒性杂质E的峰面积，并用外标法计算所述基因毒性杂质E的含量；

所述磷酸二氢钾缓冲盐和所述乙腈的体积比为95:5，所述磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为0.02mol/L，所述流动相的pH值为3.0±0.1；所述高效液相色谱柱的规格为250×4.6 mm，5µm；流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤B中，若在保留时间为17.793±0.05出峰，则判定为含有盐酸左西替利嗪；在步骤C中，求所述盐酸左西替利嗪的峰面积，并用外标法计算所述盐酸左西替利嗪的含量。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，基因毒性杂质E的含量计算公式为：

，

式中：C_T为供试品溶液中杂质E的含量，%；

C_S为杂质E参照品溶液中杂质E的浓度，g/ml；

A_S为杂质E参照品溶液中杂质E峰响应值；

A_T为供试品溶液中杂质E峰响应值；

f_u为供试品的稀释因子;

所述 。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，盐酸左西替利嗪的含量计算公式为：

，

式中：

Cr为盐酸左西替利嗪参照品溶液浓度，μg/ml；

Ar为盐酸左西替利嗪参照品溶液中主峰响应值的平均值；

P_S为对照品含量，%；

C_S为供试品溶液浓度，μg/ml；

A_S为供试品溶液中的主峰响应值；

LOD为供试品的干燥失重，%。