[发明专利]利用CRISPR/Cas9系统敲除甘蓝型油菜Bna.TT8基因的方法和应用有效
| 申请号： | 201911198641.1 | 申请日： | 2019-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN110878302B | 公开（公告）日： | 2022-12-13 |
| 发明（设计）人： | 姚璇;郭亮;胡红红;杨特武;郑祥波;戴泽彰 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/113;A01H5/00;A01H6/20 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所(普通合伙) 42001 | 代理人： | 江丽丽 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 crispr cas9 系统 甘蓝 油菜 bna tt8 基因 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，特异性靶向甘蓝型油菜
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用CRISPR-Cas9系统特异性敲除甘蓝型油菜
（1）以权利要求2所述的sgRNA为靶序列，分别设计合成正向和反向寡核苷酸序列，退火形成双链，制成Oligo二聚体；
（2）将Oligo二聚体与Cas9载体连接，获得一个植物表达载体；
（3）通过农杆菌介导的方式将这个植物表达载体转化甘蓝型油菜，在转基因后代中筛选A09染色体和C09染色体上均发生突变的
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，根据sgRNA-1设计的寡核苷酸序列如SEQID NO.3、4所示，根据sgRNA-2设计的寡核苷酸序列如SEQ ID NO.5、6所示。
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