[发明专利]非洲猪瘟病毒P30蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供了一对非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体1B11、4F7及其可变区序列，以及含该对单克隆抗体的ELISA试剂盒、胶体金试纸条，其中，ELISA试剂盒包括包被单克隆抗体1B11的包被板、酶标单克隆抗体4F7、阳性对照、阴性对照及对抗原抗体反应进行检测的检测试剂。胶体金试纸条包括金标单克隆抗体4F7作为金标垫，以及含固定单克隆抗体1B11作为检测线、固定羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗作为质控线的硝酸纤维素膜。本发明的ELISA试剂盒、胶体金试纸条可高灵敏度地检测非洲猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒P30蛋白，适用于感染不同类型非洲猪瘟病毒猪只的检测，还可适用于不同地区不同自然环境下猪的检测。

技术领域

本发明属于病毒疫病诊断技术和动物检疫领域，具体涉及一种特异性结合非洲猪瘟病毒P30蛋白的抗体或抗体片段，以及用于检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触的烈性传染性疾病，以高热、食欲废绝、皮肤和内脏器官出血为临床特征(与猪瘟表现相似)，病程短、发病率高、病死率高(可高达100％)，特别地传染源多、传播途径多、传播方式多，一旦发生损失惨重。ASF于1921年在肯尼亚首次被发现，随后在非洲南部和东部的许多国家均发现ASFV的存在。自2018年8月3日中国确诊首例发生于辽宁省沈阳市沈北新区的非洲猪瘟疫情以来，非洲猪瘟迅速在国内各省市蔓延，疫情持续扩大，一旦确诊就要采取封锁、扑杀、无害化处理、消毒等处置措施，对整个行业的影响是地震级的。ASF为世界动物卫生组织(OIE)的法定报告动物疫病，为我国规定的动物一类疾病，受到世界各国的高度重视。

ASFV是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员，是目前已知的唯一一种DNA虫媒病毒，是一种有囊膜的单分子线状双链DNA病毒，其基因组长约170kb～193kb，是动物病毒中基因组最大的病毒之一，其基因组是口蹄疫病毒的24倍、猪瘟病毒的15倍。ASFV主要感染猪和野猪，可同时在脊椎动物和无脊椎动物中复制。目前缺乏有效疫苗和特异性治疗手段，使ASF成为目前危害养猪业的最严重疫病之一。对ASF的控制目前只能依赖快速诊断、对发病动物的捕杀，以及采取有效的检疫措施和严格的卫生措施。

ASFV的实验室诊断检测方法主要分为病原学检测、血清学检测、核酸检测以及胶体金试纸条检测。截止目前，唯一曾获批的胶体金检测试纸条为北京森康生物技术开发有限公司研发的非洲猪瘟病毒抗原检测试纸条，该试纸条的敏感性仅66.67％(http://www.cadc.net.cn/sites/MainSite/tzgg/tz/201901/t20190104_102258.html、http://www.cadc.net.cn/sites/MainSite/tzgg/tz/201906/t20190612_104185.html)。特别地，使用过程中，海南省乐东黎族自治县农业农村局明文指出森康试纸条与海南省动物疫病预防中心的检测结果绝大部分相反，存在严重的假阴性，造成该县排查检测误判，使该县防非洲猪瘟的工作非常被动(http://www.sohu.com/a/313930753_168900)。总而言之，目前临床最快速、最简便的胶体金试纸条实际检测效果较差。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供了一对特异性结合非洲猪瘟病毒P30蛋白的单克隆抗体，以及含单克隆抗体的ELISA试剂盒、胶体金检测试纸条及其应用。

本发明涉及一种特异性结合非洲猪瘟病毒P30蛋白的单克隆抗体1B11的可变区序列，其中，所述单克隆抗体1B11重链可变区为SEQ.ID No.1所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；所述单克隆抗体1B11轻链可变区为SEQ.ID No.2所示序列或其简并序列编码的氨基酸序列或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。