[发明专利]一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检验方法及其应用在审
| 申请号： | 201911201728.X | 申请日： | 2019-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN110760618A | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 吴建国;刘为勇;刘映乐;谭秋萍 | 申请（专利权）人： | 广东龙帆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11401 北京金智普华知识产权代理有限公司 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 528315 广东省佛山市顺德区*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 内参基因 实时荧光定量PCR 特异性引物 保守基因序列 病毒检测技术 定性分析 定量分析 检测结果 检测试剂 检测引物 区段设计 探针检测 特异性强 荧光探针 质量监控 灵敏度 内源性 扩增 探针 灵敏 样本 标本 检测 检验 应用 | ||
1.一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测引物和探针，包括副肠孤病毒3型特异性引物及探针序列，见SEQ ID NO.1-3；内标基因Rnase P特异性引物及探针序列，见SEQ IDNO.4-6。
2.一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括如权利要求1所述的实时荧光定量PCR检测引物和探针。
3.根据权利要求2所述的一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括：
阳性对照品：副肠孤病毒3型标准品；
内标溶液：含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；
阴性对照品：RNase Free H2O。
4.一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括：以样品RNA为模板，配制扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增得到扩增曲线，对所述扩增曲线进行分析，并作出判断；所述扩增反应体系包括权利要求1所述的副肠孤病毒3型的实时荧光PCR检测引物对和探针。
5.根据权利要求4所述的一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：所述扩增反应体系包括：样品模板、权利要求1所述的副肠孤病毒3型的实时荧光PCR检测引物对和探针、5×PCR Buffer和Enzyme Mix；扩增程序为：40℃15min；95℃5min；94℃15sec、60℃30sec，45个循环。
6.根据权利要求4所述的一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，对扩增曲线进行分析判断原则为：
当FAM荧光通道中Ct≤40时，判断样品为副肠孤病毒3型阳性；
当FAM荧光通道中40<Ct≤45时，重复一次实验，如果Ct还是在此范围之内或小于40就判断样品为副肠孤病毒3型阳性，否则判断样品为副肠孤病毒3型阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道中Ct≤45时，判断样品为副肠孤病毒3型阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需要重新提取标本RNA和重新扩增。
7.如权利要求1所述的一种副肠孤病毒3型实时荧光定量PCR检测引物和探针在制备用于检测副肠孤病毒3型病毒的试剂盒中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广东龙帆生物科技有限公司，未经广东龙帆生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201911201728.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
