[发明专利]抗A型口蹄疫病毒单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及A型口蹄疫病毒的单克隆抗体2E11、3B4，以及它们制备的固相竞争ELISA检测试剂盒，该试剂盒包括有效量的单克隆抗体2E11、有效量的A型口蹄疫病毒抗原、有效量的酶标记的单克隆抗体3B4，对A型口蹄疫病毒抗原抗体反应进行检测的检测试剂，支持介质，该单克隆抗体2E11包被在支持介质上。本发明的固相竞争ELISA检测试剂盒解决了目前液相阻断ELISA试剂盒批次间差异较大，稳定性差的问题，且检测效价达到1:128，灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及一种杂交瘤细胞株、其所分泌的单克隆抗体、该单克隆抗体的可变区序列、分泌其的杂交瘤细胞株，以及使用该单克隆抗体制备的试剂盒和应用，属于含有抗体的医药配制品和免疫测定法领域。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物易患的一种热性、急性、高度接触性传染病。该病传播迅速，发病率高，该病的爆发和流行给全球养殖业带来了巨大的经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其列为A类烈性传染病之首，我国将其列为一类传染病第一位。目前对口蹄疫的防控主要是疫苗免疫为主，对疫苗免疫后抗体水平的监测是控制疫苗免疫效果的必要措施。口蹄疫有7个血清型和80多个亚型，极易发生变异，由于型与型之间无交叉免疫保护作用，同一血清型内的不同亚型的抗原性皆有不同程度的差别，血清学交叉反应的程度也各不相同,这就要求检测方法必须特异和稳定。

市场上常用的口蹄疫血清学检测方法：病毒中和试验(VNT)和液相阻断ELISA方法(LPB-ELISA)。病毒中和试验是抗体测定的金标准，但该方法需要动用活毒，且只能在特定的实验室中才能操作，操作相对复杂且存在生物安全风险。液相阻断ELISA试剂盒操作步骤繁琐，且试剂盒批次间检测结果不稳定。

近几年来，继O型口蹄疫之后，A型口蹄疫开始流行和暴发，国内市场上对免疫后抗体监测应用较多的是口蹄疫A型病毒抗体液相阻断ELISA试剂盒，但该试剂盒的捕获抗体和酶标抗体使用的都是多抗，多抗血清经常出现品质不均匀，影响检测结果。而单克隆抗体生物活性单一，易于生产和标准化，因此筛选合适的A型口蹄疫病毒的单克隆抗体制备ELISA试剂盒，解决稳定性差的问题，提高了敏感性和特异性，对于该病的诊断和预防具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了两株杂交瘤细胞株、及其所产生的抗口蹄疫病毒A型单克隆抗体在制备口蹄疫病毒A型抗体固相竞争ELISA检测试剂盒中的应用。

本发明涉及一种特异性结合A型口蹄疫病毒的单克隆抗体2E11的可变区序列，其中，所述单克隆抗体2E11的可变区序列包括重链可变区和轻链可变区；所述单克隆抗体2E11重链可变区的基因如SEQ.ID No.1或其简并序列所示或所述单克隆抗体2E11重链可变区为SEQ.ID No.1或其简并序列编码的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；以及所述单克隆抗体2E11轻链可变区的基因如SEQ.ID No.2或其简并序列所示或所述单克隆抗体2E11轻链可变区为SEQ.ID No.2或其简并序列编码的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。

单克隆抗体2E11的可变区序列具有强的与A型口蹄疫病毒特异性结合的能力。

本发明还涉及一种抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段具有所述的单克隆抗体2E11的可变区序列，所述抗体为单克隆抗体、基因工程抗体；其中，所述基因工程抗体包括单链抗体、嵌合单克隆抗体、改形单克隆抗体或所述抗体的片段；所述抗体或所述抗体的片段仍保持特异性结合A型口蹄疫病毒的能力。

作为本发明的一种实施方式，所述抗体为单克隆抗体2E11。本发明的单克隆抗体2E11的ELISA效价为1:5760。

本发明涉及一种杂交瘤细胞2E11株，其中，所述杂交瘤细胞2E11株分泌所述的抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段为所述单克隆抗体2E11。杂交瘤细胞2E11株能有效分泌单克隆抗体2E11，分泌的单克隆抗体2E11纯度高。