[发明专利]一种ITS2序列扩增通用引物、鉴定中药材的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种ITS2序列扩增通用引物，其正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示；并公开了该ITS2序列扩增通用引物在中药材鉴定中的应用。本发明还公开了一种鉴定中药材的方法及试剂盒。本发明克服了当前采用的ITS2条形码扩增引物ITS2F/ITS3R在通用性上存在的局限性，将引物的通用性提高达20％，在中药材鉴定领域具有重要价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种ITS2序列扩增通用引物及其应用，和一种鉴定中药材的方法及试剂盒。

背景技术

DNA条形码分子鉴定法利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列进行物种鉴定，具有通用、稳定、准确等特点，已纳入中国、英国、美国、日本等国家药典，当前主要用于药用植物、药材及部分饮片的鉴别。中药材D N A条形码分子鉴定通常是以ITS2(核糖体D NA第二内部转录间隔区)为主体条形码序列鉴定中药材的方法体系。

当前2015版《中华人民共和国药典》推荐的ITS2序列扩增引物为ITS2F/ITS3R，该引物在物种通用性上尚存在一定的局限性，对于山药、肉桂、黄精、虎杖等常用中药材的PCR扩增存在困难(陈士林,中国药典中药材DNA条形码标准序列，科学出版社)，需要设计特殊的引物进行ITS2序列的PCR扩增，不符合DNA条形码分子鉴定法通用性要求。

发明内容

为克服当前ITS2条形码扩增引物ITS2F/ITS3R通用性上存在局限性，本发明经开发、设计、筛选和验证，提供了一对ITS2序列通用引物，将引物的通用性提高近20％。

本发明的技术方案如下：

本发明在第一方面提供了一种ITS2序列扩增通用引物，该ITS2序列扩增通用引物的正向引物序列为ITS2F1：CAGAATCCCGTGAACCATC(SEQ ID No.1)，反向引物序列为ITS2R1：TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID No.2)。

本发明在第二方面提供了上述ITS2序列扩增通用引物在中药材鉴定中的应用。优选地，所述中药材为植物类药材。

本发明在第三方面提供了一种鉴定中药材的方法，该方法包括以下步骤：

步骤1、对中药材供试品进行预处理，提取其基因组DNA；

步骤2、以步骤1中提取的基因组DNA为模板，使用ITS2序列扩增通用引物对其进行PCR扩增，该ITS2序列扩增通用引物的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示；

步骤3、采用琼脂糖凝胶电泳法对步骤2中得到的PCR扩增产物进行检测。

在较优实施例中，上述方法还包括：对有PCR扩增条带的基因组DNA进行序列测定，测序引物与上述ITS2序列扩增通用引物相同。

在较优实施例中，上述方法还包括：对测序结果进行序列拼接，获得上述中药材供试品的DNA条形码序列。

在较优实施例中，上述方法还包括：采用数据库对上述DNA条形码序列进行BLAST鉴定，判断上述中药材供试品的物种。

在较优实施例中，上述数据库包括中药材DNA条形码鉴定系统(http：//www.tcmbarcode.cn)和GenBank数据库BLAST鉴定系统(http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。

在较优实施例中，上述中药材为植物类药材，包括采用2015版《中华人民共和国药典》推荐的ITS2序列扩增引物ITS2F/ITS3R难以扩增的黄精等药用植物。