[发明专利]一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液及其应用

权利要求书

1.一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液，其特征在于，所述裂解液至少含有以下组分，其中，以裂解液的总量为基准计，各组分的含量为：

所述裂解液用于提取的HCMV的核酸来源于羊水样本。

2.如权利要求1所述的磁珠法HCMV核酸提取用裂解液，其特征在于，所述裂解液至少含有以下组分，其中，以裂解液的总量为基准计，各组分的含量为：

3.如权利要求1-2任一所述磁珠法HCMV核酸提取用裂解液的制备方法，至少包含以下步骤：

将异硫氰酸胍、十二烷基硫酸钠、NP40、Tris-HCl、EDTA和水混合，调节所述裂解液的pH值，加入β-巯基乙醇，获得所述裂解液。

4.如权利要求1-2任一所述的磁珠法HCMV核酸提取用裂解液用于制备羊水HCMV核酸提取产品或用于羊水中HCMV核酸提取的用途。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述提取样本中HCMV核酸时，所需样本用量至少为200μL。

6.一种磁珠法HCMV核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1～2任意一项所述的裂解液，所述试剂盒还包括磁珠、洗涤液、洗脱液、RNA助沉剂和蛋白酶K中的一项或多项。

7.如权利要求6所述的磁珠法HCMV核酸提取的试剂盒，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：

(1)所述磁珠使用浓度为50-100mg/mL；

(2)所述洗涤液包括第一洗涤液，所述第一洗涤液中至少含有以下组分，以第一洗涤液的总量为基准计，各组分的含量为：异硫氰酸胍：0.5-2mol/L，氯化钠：0.1-0.5mol/L，曲拉通X-100：0.5-1％(w/v)，无水乙醇：体积百分比为30-50％，Tris-HCl：2-8mmol/L，溶剂为水；

(3)所述洗涤液还包括第二洗涤液，所述第二洗涤液至少含有以下组分，其中，以第二洗涤液的总量为基准计，各组分的含量为：无水乙醇：体积百分比为75％，溶剂为水；

(4)所述洗脱液至少含有以下组分，其中，以洗脱液的总量为基准计，各组分的含量为：Tris-HCl：10-80mmol/L，EDTA 0.5-25mmol/L，溶剂为水；

(5)使用时，裂解液与磁珠的体积比为(300-600)μL：20μL；

(6)所述裂解液与磁珠混合后预装在96孔板中；

(7)所述第一洗涤液、第二洗涤液、洗脱液分别预装在96孔板中；

(8)所述试剂盒用于提取羊水样本中的HCMV核酸。

8.采用权利要求7所述的磁珠法HCMV核酸提取试剂盒进行HCMV核酸提取的方法，至少包括以下步骤：

(1)将裂解液与磁珠混合液中加入样本，混匀，加入RNA助沉剂和蛋白酶K，在外部磁场的作用下形成磁珠-核酸复合物；

(2)将所述磁珠-核酸复合物中加入第一洗涤液，混匀，在外部磁场作用下进行磁分离，弃掉废液，得到第一混合物；

(3)将第一混合物中加入第二洗涤液，混匀，在外部磁场作用下进行磁分离，得到第二混合物；

(4)将第二沉淀物中加入洗脱液，混匀，在外部磁场作用下进行磁分离，所述上清液即为核酸溶液；

所述样本为羊水样本。