[发明专利]一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液及其应用

说明书

本发明提供一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液，所述裂解液至少含有以下组分，其中，以裂解液的总量为基准计，各组分的含量为：异硫氰酸胍1‑3mol/L，十二烷基硫酸钠0.05‑0.1％(w/v)，NP40 1‑5％(w/v)，Tris‑HCl 10‑80mmol/L，EDTA 5‑15mmol/L，β‑巯基乙醇0.1‑0.5％(v/v)，溶剂为水。本发明解决了市面上无针对羊水样本的HCMV定量检测试剂的现状，羊水样本成分复杂，含多种不明抑制剂存在。本发明使用磁珠法，成功的实现了对羊水样本的高效提取，使得对羊水样本中的HCMV进行定量成为可能。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液及 其应用。

背景技术

HCMV是一种广泛存在的双链DNA病毒，主要通过性接触或直接接触受感染者的血液、尿液或唾液传播，平均潜伏期大约28-60天。妊娠期孕妇的免疫力降低，一方面可以抑制机体的炎症反应从而增加母体对胎儿抗原容受性，另一方面可能会增加孕妇和胎儿对某些 传染性疾病的易感性。孕妇发生HCMV原发性感染后，宫内胎儿感染率高达30％-40％。

目前市面上HCMV检测的试剂盒种类繁多，根据检测的靶物质可分为抗体检测和核酸 检测。

HCMV感染首先诱导机体产生特异性IgM抗体，随后出现IgG抗体。孕妇的HCMV原 发性感染可以通过抗体检测实现，具体有以下方法：

(1)检测孕妇血清抗体水平，间隔3-4周后重复测定。诊断依据包括血清转化现象(初次血清抗体阴性的孕妇出现特异性IgG抗体)，或者IgG抗体滴度增加4倍；

(2)IgG抗体亲和力测定：亲和力指数＜30％，提示孕妇HCMV感染为近2-4个月内的原发性感染。

但对抗体的检测并不能反应当下样本中HCMV的载量，对于胎儿的先天性感染并无直 接证据。HCMV可通过胎儿尿液排出到羊水中，目前认为检测到HCMV-DNA是产前胎儿HCMV宫内感染的最直接证据。

目前从国家药品监督管理局官方网站医疗器械查询处查到获得医疗器械注册证的HCVM 核酸检测有15种,覆盖的样本类型包括血清、血浆、尿液、乳汁和淋巴细胞，其中多数为定 量产品。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种磁珠法核酸提取用裂解液及 其应用。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种磁珠法核酸提取用裂解液， 所述裂解液至少含有以下组分，其中，以裂解液的总量为基准计，各组分的含量为：

本发明第二方面提供一种磁珠法HCMV核酸提取用裂解液的制备方法，至少包含以下步 骤：

将异硫氰酸胍、十二烷基硫酸钠、NP40、Tris-HCl、EDTA和水混合，调节所述裂解液的pH值，加入β-巯基乙醇，获得所述裂解液。

本发明第三方面提供前述磁珠法HCMV核酸提取用裂解液用于制备样本中HCMV核酸 提取产品或用于羊水中HCMV核酸提取的用途。

本发明第四方面提供一种磁珠法HCMV核酸提取的试剂盒，所述试剂盒包括前述裂解 液，所述试剂盒还包括磁珠、洗涤液、洗脱液、RNA助沉剂和蛋白酶K中的一项或多项。

本发明第五方面提供一种HCMV核酸提取的方法，至少包括以下步骤：

(1)将裂解液与磁珠混合液中加入样本，混匀，加入RNA助沉剂和蛋白酶K，在外 部磁场的作用下形成磁珠-核酸复合物；

(2)将所述磁珠-核酸复合物中加入第一洗涤液，混匀，在外部磁场作用下进行磁分离， 弃掉废液，得到第一混合物；