[发明专利]一种快速突变Y染色体STR分型系统、下一代测序分型试剂盒及分型方法和应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种快速突变Y染色体STR分型系统、下一代测序分型试剂盒及分型方法和应用。该分型体系覆盖了19个基因座，能够从长度多态性和序列多态性两方面对样品进行全面分析，系统效能高，男性个体单倍型差异度大，可大大提高男性亲缘个体识别的灵敏度，并可应用于男性同卵双生子辨别。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及一种快速突变Y染色体STR 分型系统、下一代测序分型试剂盒及分型方法和应用。

背景技术

在涉及男性犯罪嫌疑人的案例中，Y-STR(Y染色体STR)可以用于排查男性家系，缩小侦查范围，但常规Y-STR在同一男性家系中大多表现一致的单倍型，所以不能用于男性亲缘个体识别，包括同卵双生兄弟。据文献报道，RM Y-STR(快速突变Y染色体STR)经群体研究发现，其突变率高，具有男性亲缘个体辨别能力，仅13个位点经过毛细管电泳分型技术便可区分近70％的父子，56％的兄弟和67％的堂兄弟。但RM Y-STR具有高突变率、多拷贝和复杂核心重复结构等特点，毛细管电泳技术仅能够发现其长度多态性，而不能发现其序列多态性信息，尚未报道能应用于成功区分男性同卵双生兄弟。

发明内容

针对现有RM Y-STR不能区分男性同卵双生兄弟的技术问题，本发明提供了一种快速突变Y染色体STR分型系统。

以及，本发明还提供了一种快速突变Y染色体STR下一代测序分型试剂盒。

以及，本发明还提供了一种快速突变Y染色体STR的下一代测序分型方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种快速突变Y染色体STR分型系统，包括19个基因座，所述19个基因座为：DYS630、DYS464、DYF403S1a、DYF403S1b1、DYF403S1b2、DYF399S1、DYS518、DYS527、DYS713、DYS612、DYS627、DYS526a、DYS526b、DYF404S1、 DYF387S1、DYS449、DYS547、DYS570、DYS576。

本系统覆盖了19个基因座，能够从长度多态性和序列多态性两方面对样品进行全面分析，与毛细管电泳分析技术相比，增加了位点数目、序列多态性信息，提高了系统效能，增加了男性个体单倍型差异度，从而大大提高男性亲缘个体识别的灵敏度，并可应用于男性同卵双生子辨别，为涉及男性个体识别甚至男性同卵双生个体鉴别提供了科学方法。

以及，本发明还提供了一种快速突变Y染色体STR下一代测序分型试剂盒，所述下一代测序分型试剂盒包括下一代测序定制panel试剂盒，所述下一代测序定制panel试剂盒中包括上述19个基因座的68条PCR扩增特异性引物，所述PCR扩增特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.68所示。上述PCR扩增特异性引物高度覆盖该19个基因座，覆盖度99％。

优选地，所述下一代测序分型试剂盒还包括FuPa试剂、Ampliseq CD Indexes和Lib Amp Mix。Ampliseq CD Indexes是以孔为唯一单位的双端标签接头预混液，即每个孔内为两种标签序列和通用接头序列，每一个孔道两种标签序列代表唯一组合，能够帮助区分和确定唯一样本。FuPa试剂和Lib Amp Mix 均适用于利用上述68条PCR扩增特异性引物构建文库的过程。

优选地，所述下一代测序分型试剂盒还包括血液DNA提取试剂盒、DNA 定量试剂盒和实时荧光定量检测试剂盒。

优选地，所述下一代测序分型试剂盒还包括MiSeq上机测序试剂，使该试剂盒能够在MiSeq平台进行下一代测序分型。

以及，本发明实施例还提供了一种快速突变Y染色体STR下一代测序分型方法，所述方法中用上述试剂盒进行样品检测。

优选地，所述下一代测序分型方法至少包括以下操作步骤：