[发明专利]一种阳离子微泡的制备方法及应用

说明书

本发明涉及微泡技术领域，具体为一种阳离子微泡的制备方法，及超声联合阳离子微泡在制备孤独症药物中的应用。本发明通过先对PEI进行改性，由改性后的PEI与脂质体DSPC和DSPE‑PEG2000制备形成发泡体，发泡体再与由磷酸缓冲盐溶液、甘油和丙二醇按一定配比组成的水合液制成阳离子微泡液，将阳离子微泡液上方的气体置换为全氟丙烷后进行充分震荡即可形成粒径均一、稳定性好、电位适中、黏附能力强的阳离子微泡。超声联合本发明制备的阳离子微泡能局部、可逆和无创的开放BBB，阳离子微泡黏附BDNF质粒后注入到小鼠、大鼠体内后，超声探头辐照大鼠，可以无创、可逆、重复地开放BBB，增加BDNF在脑内的浓度，达到治疗孤独症大鼠模型的目的。

技术领域

本发明涉及微泡技术领域，尤其涉及一种阳离子微泡的制备方法，及超声联合阳离子微泡在制备孤独症药物中的应用。

背景技术

孤独症(Autism)，又称自闭症、孤独症谱群疾病。以社会交往障碍、言语和非言语发育障碍、兴趣范围狭窄和重复刻板行为为主要特征，孤独症的症状多数始于婴儿期，通常在3岁以前就出现神经精神发育异常，多数伴有不同程度的智力发育落后。自1943 年首先报道该病以来，随着对孤独症认识的不断地加深，近年来，世界各地报道的孤独症的发病率逐年上升，有流行病学调查显示，孤独症的患病率约为4/1000，有研究估计，现我国患病人数约有400万-1000万。脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在孤独症患者血清内存在异常。BDNF神经元和BDNF自身直接与孤独症的发病有关，所以BDNF有希望成为孤独症治疗的靶点。然而，由于BDNF分子量较大 (12.3kDa)，难以透过血脑屏障(Blood-Brain Barrier,BBB)，所以如何促进BDNF无创的通过BBB，增加BDNF在中枢神系统内的有效药物浓度，将是BDNF治疗孤独症的一个关键科学问题。

近年来，低频聚焦超声(Focused ultrasound，FUS)联合微泡(Microbubbles，MB)被证明是一种无创、短暂、可逆、局部地开放BBB的方法，为临床应用有效治疗颅内疾病的药物提供了非常积极的应用价值。微泡的均匀性、稳定性、电位及黏附能力等，对 BBB的开放效果有决定性的影响，因此关于微泡的性能及制备方法也成了研究的焦点之一。

发明内容

本发明针对现有低频聚焦超声联合微泡技术有待进一步深入研究，提供一种有助于提高对BBB开放效果的阳离子微泡的制备方法，以及所述阳离子微泡在制备孤独症的药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

本发明的第一方面，提供一种阳离子微泡的制备方法，包括以下步骤：

S1、室温下，硬脂酸与PEI在CDI的催化下反应，制得改性后的聚醚酰亚胺SPEI；所述硬脂酸与PEI的摩尔比为(1.8-2.0):1；所述CDI与PEI的摩尔比为(1.8-2.0):1。

优选的，所述PEI的分子量为600Da；所述硬脂酸与PEI的摩尔比为1.8:1；所述CDI与PEI的摩尔比为1.8:1。

优选的，步骤S1中，硬脂酸与CDI在氮气保护下混合搅拌1h以上，得预反应液；在氮气保护下，预反应液与PEI在室温下反应，得到悬浊液；悬浊液在冰乙醚的作用下陈化后干燥，得到SPEI。

S2、将SPEI、脂质体DSPC和DSPE-PEG2000溶解于氯仿中，得到混合液；所述SPEI 与脂质体DSPC的质量比为1:(2.0-2.5)；所述SPEI与DSPE-PEG2000的质量比为1: (0.3-0.4)。

优选的，所述SPEI与脂质体DSPC的质量比为1:2.33；所述SPEI与DSPE-PEG2000 的质量比为1:0.33。

S3、将混合液中的氯仿蒸发完，形成白色产物。