[发明专利]一种合成利拉鲁肽的方法

权利要求书

1.一种合成利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)通过固相合成法，按利拉鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂偶联体系进行氨基酸的活化偶联，得到利拉鲁肽9-37全保护肽树脂；其中，26位Lys采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH为原料；再采用碱催化体系将Fmoc-Ala-Osu和Boc-His(Trt)-Osu依次连接到利拉鲁肽9-37全保护肽树脂上，得到利拉鲁肽主链肽树脂；

(2)利拉鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到利拉鲁肽粗肽；

(3)经纯化，冻干，得到利拉鲁肽成品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的碱催化体系为N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啡啉。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缩合剂偶联体系为PyBrop与碱的混合体系，所述的碱为N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啡啉。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的PyBrop和碱用量分别为氨基酸1～2倍和2～4倍摩尔量。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，采用替代度为0.2～0.35mmol/g的Fmoc-Gly Wang树脂作为固相载体树脂。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述裂解的裂解液按体积含量为90％～95％TFA、1％～5％间甲酚、1％～5％EDT和1～5％水。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，裂解液的加入量为10～12ml/g利拉鲁肽全保护肽树脂。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述的裂解是在20～30℃反应2-3h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括利拉鲁肽纯化、脱盐和冻干步骤。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)采用15～30％哌啶/DMF去保护液脱除Fmoc-Gly-Wang树脂上的Fmoc保护基，得到H-Gly-Wang树脂；

(2)通过固相偶联合成法，按利拉鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂PyBrop依次将Fmoc-Arg(Pbf)-OH﹑Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH﹑Fmoc-Leu-OH﹑Fmoc-Trp(Boc)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ile-OH﹑Fmoc-Phe-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Ala-OH﹑Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH﹑Fmoc-Glu(OtBu)-OH﹑Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH的氨基酸活化偶联，依次将氨基酸接到步骤(1)H-Gly-Wang树脂中，得到利拉鲁肽9-37全保护肽树脂；

(3)采用碱催化反应依次将Fmoc-Ala-Osu和Boc-His(Trt)-Osu接到步骤(2)利拉鲁肽9-37全保护肽树脂中，得到利拉鲁肽全保护肽树脂；

(4)利拉鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到利拉鲁肽粗品；

(5)步骤(4)的利拉鲁肽粗品经反向高效液相色谱纯化、脱盐，冻干后得到利拉鲁肽。