[发明专利]一种合成利拉鲁肽的方法

说明书

本发明公开了一种合成利拉鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。本发明的方法包括如下步骤：以Fmoc‑Gly‑Wang Resin为固相合成起始载体，通过使用新型缩合剂PyBrop(三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐)进行利拉鲁肽(序列C端→N端)37到9位29个氨基酸的活化偶联，其中26位采用Fmoc‑Lys(Pal‑Glu‑OtBu)‑OH作为原料；另第7位和第8位分别采用Boc‑His(Trt)‑Osu、Fmoc‑Ala‑Osu进行缩合，得到利拉鲁肽全保护肽，经裂解沉淀，得到利拉鲁肽。本发明方法提升了氨基酸偶联效率，极大降低了利拉鲁肽合成过程中产生的消旋肽和缺失肽杂质，尤其是有效抑制或减少了与产品性质极为相近的消旋杂质(D‑His⁷和D‑Ala⁸)的产生，提高了粗品的纯度，降低了纯化的难度，利于进行工业化放大生产。

技术领域

本发明涉及一种合成利拉鲁肽的方法，属于多肽合成技术领域。

背景技术

利拉鲁肽，英文名Liraglutide，为丹麦诺和诺德公司自主研发，是一种长效治疗II型糖尿病的胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物，属于GLP-1受体激动剂，是首个为II型糖尿病治疗开发的人高血糖素样多肽-1(GLP-1)类似物。该药于2010年1月25获得FDA批准上市，于2011年3月4日获SFDA批准在中国上市。利拉鲁肽作为新一代以肠促胰岛素为基础的降血糖药物，不仅作用时间长，而且充分保留了天然GLP-1的多项生理活性，可安全有效降糖并可能对多种心血管危险因素有保护作用，为2型糖尿病的治疗带来了新的选择。临床治疗效果令人鼓舞。目前已报道的利拉鲁肽的合成方法主要采用固相合成，主要分为常规法和片段法，都有一定程度上的缺陷：比如中国专利CN102286092B中用到了Fmoc-Lys(Alloc)-OH，在最后的脱除中用到了重金属钯，后续重金属很难去除干净影响产品的品质；中国专利CN103980358B将修饰后的Ly s接入主链，由于侧链基团大活性低，容易偶联不完全，且采用的是常规缩合体系，对于后续氨基酸的偶联造成一定程度上的困难，产生大量的缺失肽和消旋肽等杂质肽，影响下游纯化；中国专利CN103864918B把肽链分为三个片段进行偶联，该方法浪费原料，且对于中间体片段需进行质量控制，步骤繁琐又增加了成本，得不偿失。因此，急需一种简单而高效的利拉鲁肽的合成方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种利拉鲁肽的制备方法，本发明的方法采用缩合剂PyBrop，提升了偶联效率，减少了杂质的产生，提高了粗肽的纯度和收率，降低合成成本；且本发明采用Boc-His(Trt)-Osu，Fmoc-Ala-Osu做原料，减少杂质的产生，进一步提高了粗品的纯度和收率。

本发明的第一个目的是提供一种合成利拉鲁肽的方法，包括如下步骤：

(1)通过固相合成法，按利拉鲁肽主链C端至N端肽序，采用缩合剂偶联体系进行氨基酸的活化偶联，得到利拉鲁肽9-37全保护肽树脂；其中，26位Lys采用Fmoc-Lys(Pal-Glu-OtBu)-OH为原料；再采用碱催化体系将Fmoc-Ala-Osu和Boc-His(Trt)-Osu依次连接到利拉鲁肽9-37全保护肽树脂上，得到利拉鲁肽主链肽树脂；

(2)利拉鲁肽全保护肽树脂经裂解后得到利拉鲁肽粗肽；

(3)经纯化，冻干，得到利拉鲁肽成品。

进一步地，所述的碱催化体系为N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啡啉。

进一步地，所述的缩合剂偶联体系为PyBrop与碱的混合体系，所述的碱为N,N-二异丙基乙胺(DIEA)或N-甲基吗啡啉(NMM)。

进一步地，所述的PyBrop和碱用量分别为氨基酸1～2倍和2～4倍摩尔量。优选PyBrop和碱用量分别为氨基酸1.2倍和3倍摩尔量。

进一步地，在步骤(1)中，采用替代度为0.2～0.35mmol/g的Fmoc-Gly Wang树脂作为固相载体树脂。