[发明专利]同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法在审
| 申请号： | 201911214542.8 | 申请日： | 2019-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN110927310A | 公开（公告）日： | 2020-03-27 |
| 发明（设计）人： | 贾永娟;倪君君 | 申请（专利权）人： | 沈阳和合医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/88 | 分类号： | G01N30/88;G01N33/82 |
| 代理公司： | 济南信达专利事务所有限公司 37100 | 代理人： | 程佩玉 |
| 地址： | 110168 辽宁省沈阳市浑南*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同时 检测 微量 25 羟基 维生素 d3 d2 含量 方法 | ||
1.同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法，其特征在于，包括：
利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的25羟基-维生素D3的标准品及内标物、25羟基-维生素D2的标准品及内标物，不同标准溶液中同一标准品的浓度不同；
根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到25羟基-维生素D3的标准曲线方程和25羟基-维生素D2的标准曲线方程；
将一定量的混合内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本；其中，所述血液样本经处理至少0.2mL待检测血液而得到，所述混合内标工作液中含有浓度已知的25羟基-维生素D3的内标物和25羟基-维生素D2的内标物；
利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样本，得到待测样本的色谱图；
根据待测样本的色谱图和拟合得到的各个标准曲线方程，计算所述血液样本中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2的含量；
其中，所述检测条件中的液相条件包括：Kinetex F5色谱柱，色谱柱的长度为50mm、内径为3.0mm、填料粒径为2.6μm，流动相A为含体积比为0.05％-0.25％的甲酸、浓度为0.5-2.5mmol/L的甲酸铵的水，流动相B为甲醇，分析时间为3.8-4.5min，柱温为25-40℃，进样量为0.1-30μL，流速为0.3-0.5mL/min。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述液相条件包括：洗脱方式为等度洗脱；
流动相A为含体积比为0.1％的甲酸、浓度为1mmol/L的甲酸铵的水；
流动相A与流动相B的体积比为20:80。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述液相条件包括：柱温为30℃，进样量为20μL，流速为0.4mL/min。
4.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于，
所述检测条件中的串联质谱条件包括：采用电喷雾离子源ESI，正离子扫描模式，选择反应监测模式，Gas Temp为250-350℃，Gas Flow为3-8L/min，NebuLizer为35-50psi，Sheath Gas Temp为300-400℃，Sheath Gas Flow为8-14L/min，Capillary为3000-4000V，Delta EMV(+)为300-600V。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，
所述串联质谱条件包括：Gas Temp为300℃，Gas Flow为5L/min，NebuLizer为40psi，Sheath Gas Temp为350℃，Sheath Gas Flow为10L/min，Capillary为3500V，Delta EMV(+)为600V。
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