[发明专利]同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法

说明书

本发明提供了同时检测微量血中25羟基‑维生素D3和25羟基‑维生素D2含量的方法。基于特定的液相条件，利用高效液相串联质谱仪分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，各标准溶液中均含有浓度已知的25羟基‑维生素D3及D2的标准品及内标物；根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到标准曲线方程；将混合内标工作液添加到经处理至少0.2mL待检测血液而得到的血液样本中，经样本前处理以得到待测样本；同样检测待测样本得到其色谱图；根据待测样本的色谱图和各个标准曲线方程，计算血液样本中25羟基‑维生素D3及D2的含量。本发明能够更加快速的同时检测微量血中该两种维生素的含量。

技术领域

本发明涉及临床化学技术领域，特别涉及同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法。

背景技术

维生素D又称抗佝偻病维生素，为固醇类衍生物，其家族成员中最重要的成员是25羟基-维生素D3(胆钙化醇)和25羟基-维生素D2(麦角钙化醇)，皆为脂溶性维生素。当其缺乏时，会产生维生素D缺乏症，主要表现为骨骼病变，同时伴有肌肉松弛，非特异性神经精神症状、生长迟缓，免疫力低下及相应的血浆生化改变；严重缺乏时，会形成抗维生素D佝偻病、软骨营养不良、老年人骨质疏松症等。产生病症的机理是维生素D缺乏时肠道对钙、磷吸收减少，血中钙、磷浓度下降，从而引起全身性钙、磷代谢失常，致使钙盐不能正常的沉着在骨骼的生长部分，最终形成骨骼畸形。

25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2临床上主要用于治疗维生素D缺乏症，预防儿童佝偻病、老年人骨质疏松症、肾性骨病、甲状旁腺素缺少症以及癫痫患者使用苯巴比妥导致的骨症。其作用机理是促进小肠黏膜刷状缘对钙的吸收及肾小管重吸收磷，提高血钙、血磷浓度，协同甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)，促进旧骨释放磷酸钙，维持及调节血浆钙、磷正常浓度，促使钙沉着于新骨形成部位，使枸橼酸盐在骨中沉积，促进骨钙化及成骨细胞功能和骨样组织成熟。

维生素D缺乏症为一种小儿常见病，而对于婴幼儿特别是新生儿以及其他存在静脉穿刺的人群来说，末梢采血就显得尤为重要。

目前已有针对婴幼儿血液中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的检测方法。比如，同时检测人末梢血中25-羟基维生素D3和25-羟基维生素D2含量的方法，公开号为CN110208435A，但其分析时间较长，为5.0min。

发明内容

本发明提供了同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法，能够更加快速的同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2的含量。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了同时检测微量血中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2含量的方法，包括：

利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的25羟基-维生素D3的标准品及内标物、25羟基-维生素D2的标准品及内标物，不同标准溶液中同一标准品的浓度不同；

根据各个标准溶液的色谱图，拟合得到25羟基-维生素D3的标准曲线方程和25羟基-维生素D2的标准曲线方程；

将一定量的混合内标工作液添加到一定量的血液样本中，并进行样本前处理以得到待测样本；其中，所述血液样本经处理至少0.2mL待检测血液而得到，所述混合内标工作液中含有浓度已知的25羟基-维生素D3的内标物和25羟基-维生素D2的内标物；

利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样本，得到待测样本的色谱图；

根据待测样本的色谱图和拟合得到的各个标准曲线方程，计算所述血液样本中25羟基-维生素D3和25羟基-维生素D2的含量；