[发明专利]一种免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法

说明书

本发明公开了一种免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法，包含如下步骤：采取20例健康志愿者和某省肿瘤医院血液科20例AML患者外周血25ml,运用常规单个核细胞提取法提取单个核细胞，分别放于培养基的培养孔中培养；运用流式细胞仪检测培养第0d、5d、10d、15d、20d及第25d的细胞数量及细胞存活率，采用该方法能进一步提高NK细胞的纯度、绝对值、功能表型及分泌IFNγ的能力。

技术领域

本发明涉及一种细胞培育的方法，尤其涉及一种免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法，属于细胞生物学技术领域。

背景技术

过继性T细胞治疗是过继性细胞免疫治疗研究的重点，但是对MHCI类份子阴性的肿瘤细胞无效，而NK细胞（Natural killer cell，NK细胞）由于表达MHCI类分子的抑制性受体-杀伤细胞抑制性受体（Killer inhibitory receptor，KIR）,可以杀灭MHCI类分子阴性的肿瘤，随着对NK细胞研究的深入，目前NK细胞用于肿瘤免疫治疗成为业界研究的热电，19世纪80年代兴起的细胞过继免疫治疗带来了肿瘤患者一个新的希望，自然杀伤（naturalkiller，NK）细胞作为机体抗肿瘤的第一道防线，再加上其对肿瘤细胞的杀伤作用是由其表面抑制性受体和活化性受体的共同信号决定，所以NK细胞成为近年细胞过继免疫治疗的研究热点。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提出免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法，采用该方法能进一步提高NK细胞的纯度、绝对值、功能表型及分泌IFNγ的能力。

为达到上述技术目的，本发明采用了一种免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法，包含如下步骤：

（1）采取20例健康志愿者和某省肿瘤医院血液科20例AML患者外周血25ml,运用常规单个核细胞提取法提取单个核细胞，分别放于培养基的培养孔中培养，前5d加入一定量ulCD3McAb，在培养的第5d，倒掉含有CD3McAb的培养液，即加入含有rhIL-2的SCGM培养基，隔日补充一次培养液，直至25d。

（2）运用流式细胞仪检测培养第0d、5d、10d、15d、20d及第25d的细胞数量及细胞存活率。

（3）运用流式细胞仪检测培养第0d、5d、10d、15d、20d及第25d细胞中的NK细胞百分率和T细胞百分率。

（4）采用比色法检测培养第0d、5d、10d、15d、20d及第25d分选出的NK细胞对K562细胞和RPMI8226细胞的杀伤活性。

优选的，所述步骤（1）中，培养基中含有SCGM。

进一步优选的，所述步骤（1）中，前5d加入0.7ulCD3McAb。

采用上述方法后，本发明具有如下优点：

1、本发明的方法证明了SCGM培养基联合IL-12/15/18是体外培养制备NK细胞的更好策略，能进一步提高NK细胞的纯度、绝对值、功能表型及分泌IFNγ的能力；

2、本发明的方法为临床上同种异体NK细胞治疗移植后复发AML提供了理论依据，可进一步提高GVL效应并减少GVHD发生。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。

一种免疫细胞体外诱导培育增强免疫活性的方法，包含如下步骤：

（1）采取20例健康志愿者和某省肿瘤医院血液科20例AML患者外周血25ml,运用常规单个核细胞提取法提取单个核细胞，分别放于含有SCGM的培养基的培养孔中培养，前5d加入0.7ulCD3McAb，在培养的第5d，倒掉含有CD3McAb的培养液，即加入含有rhIL-2的SCGM培养基，隔日补充一次培养液，直至25d。