[发明专利]一种核糖体印迹测序文库构建方法在审
| 申请号： | 201911217929.9 | 申请日： | 2019-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN112899345A | 公开（公告）日： | 2021-06-04 |
| 发明（设计）人： | 卢小龙;张弓;陈洋;金静洁 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 苏运贞 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 核糖体 印迹 序文 构建 方法 | ||
1.一种核糖体印迹测序文库构建方法，包括如下步骤：
(1)提取样品的RFP-RNA；
(2)修复步骤(1)得到的RFP-RNA的两端结构，得到正常结构的RNA；
(3)将步骤(2)得到的正常结构的RNA采用small RNA建库试剂盒进行文库构建。
2.根据权利要求1所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的样品来源于动物、植物或微生物；所述的样品包括细胞和组织。
3.根据权利要求1所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的RFP-RNA是由核糖体印迹测序实验得到的长度为18-35nt的RNA。
4.根据权利要求1所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：步骤(2)中所述的修复RFP-RNA的两端结构是先对RFP-RNA进行3’末端脱磷酸，然后再进行5’末端磷酸化。
5.根据权利要求4所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：
所述的脱磷酸和所述的磷酸化所采用的酶为T4 PNK多聚核苷酸激酶；
所述的脱磷酸的反应条件为37℃下反应10～180min；
所述的磷酸化的反应条件为37℃下反应10～180min；
所述的脱磷酸和所述的磷酸化所采用的缓冲液为T4 Polynucleotide Kinasebuffer。
6.根据权利要求5所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：
所述的脱磷酸的反应条件为37℃下反应60min；
所述的磷酸化的反应条件为37℃下反应60min。
7.根据权利要求1所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：
步骤(3)中所述的small RNA建库试剂盒为使用RNA两端接上接头原理的建库试剂盒，即使用连接酶连接5’和3’接头进行测序文库构建。
8.根据权利要求1所述的核糖体印迹测序文库构建方法，其特征在于：步骤(3)中所述的small RNA建库试剂盒为华大智造MGIEasy small RNA文库制备试剂盒和NEBNext SmallRNA Library Prep Set for Illumina中的一种。
9.一种核糖体印迹测序文库，通过权利要求1～8任一项所述的构建方法构建得到。
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