[发明专利]一种耐高温、带PTD的突变型SOD和应用有效
| 申请号： | 201911218092.X | 申请日： | 2019-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN110872581B | 公开（公告）日： | 2022-07-22 |
| 发明（设计）人： | 韩宏岩;许维岸;林安安 | 申请（专利权）人： | 苏州大学;苏州百思生物技术有限公司;苏州博盈生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;A61K38/44;A61P35/00;A61K8/66;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08;A23L33/17 |
| 代理公司： | 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 陆金星 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 耐高温 ptd 突变型 sod 应用 | ||
1.一种耐高温、带PTD的突变型SOD，其特征在于：所述突变型SOD的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID NO.3所示，所述PTD的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.4所示，所述突变型SOD的编码基因序列为序列表中的SEQ ID NO.1所示，所述PTD的基因序列为序列表中SEQID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD，其特征在于：由蛋白转导结构域PTD和嗜热菌HB27来源的SOD组成的融合蛋白，其中SOD氨基酸序列发生I28L和D108A双突变。
3.根据权利要求1所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD，其特征在于：以pet28b、pGEX-4T-2、pMAL-2c、pQE-9、pBAD-Myc、pBAD-His、pGEX-6T-l中的任意一种为原核表达载体。
4.根据权利要求1所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于，包含如下步骤：利用热激法将重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21，加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷进行摇床振荡培养，诱导PTD-SOD-MUTANT蛋白表达，超声裂解法处理诱导表达后菌体，在天然条件下纯化，依次加入咪唑浓度为25mM的Washing Buffer和咪唑浓度为250mM的Elution Buffer，纯化PTD-SOD-MUTANT蛋白。
5.根据权利要求4所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于：所述摇床转速为200-250rpm/min。
6.根据权利要求4所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于：所述诱导温度为30-38℃。
7.根据权利要求4所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于：所述诱导时间为3-8h。
8.根据权利要求4所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于：在PTD-SOD-MUTANT蛋白表达中，IPTG终浓度范围为0.1-1.5mM。
9.根据权利要求4所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD的表达和纯化方法，其特征在于：所述纯化方法采用亲和层析、等电点沉淀法、盐溶与盐析、透析和超滤、密度梯度离心、凝胶过滤中的任意一种。
10.根据权利要求1所述的一种耐高温、带PTD的突变型SOD在制备抑制黑色素瘤细胞药物中的应用。
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