[发明专利]一种耐高温、带PTD的突变型SOD和应用

说明书

本发明公开了一种PTD‑SOD‑MUTANT蛋白，它是由蛋白转导结构域PTD和嗜热菌HB27来源的SOD组成的融合蛋白，其中SOD氨基酸序列发生I28L和D108A双突变。PTD‑SOD‑MUTANT蛋白具有热稳定性好，活性高，可穿过细胞膜进入细胞等优点。体外和体内实验表明此蛋白对小鼠B16黑色素瘤细胞和小鼠恶性黑色素瘤均有很强的增殖抑制作用，此蛋白与阿霉素(DOX)联用对肿瘤细胞有协同增效作用。PTD‑SOD‑MUTANT蛋白可作为药物组合物、化妆品活性组分、食品添加剂等，在药物研发领域、日用品领域、食品领域等具有较大的应用价值与广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及酶与应用，特别涉及一种耐高温、带PTD的突变型SOD和应用。

背景技术

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase.简称SOD)是美国科学家Mccord和Fridovich于1969年从牛血红细胞中发现的一种含有金属离子的酶。该酶能催化超氧阴离子自由基生成H₂O₂和O₂，是清除生物体内多余超氧阴离子自由基的一种氧化还原酶。根据SOD活性中心金属离子的不同可将SOD分为四类：Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD和Ni-SOD。SOD对癌症、炎症、缺血再灌注损伤、辐射损伤等均有一定的疗效，还可减少抗癌药物对细胞和心脏的毒副作用，是具有抗肿瘤活性的最有效的抗氧化酶之一，因此在保健品、医药、化妆品等领域中具有重要的应用价值。然而在实际应用中SOD仍然存在一些不足，如热稳定性差，在高温下易失活；细胞膜上没有特异性受体，难以进入细胞内发挥作用；天然SOD分离纯化成本昂贵等。虽然目前的基础研究已经证明了SOD的功效和作用方式，但由于现有技术中的SOD在热稳定性、活性维持等方面存在缺陷，极大地限制了SOD在化妆品、食品和医药领域中的应用，不能很好地达到预期的效果。

HIV-1编码的反式激活蛋白(TAT)中的蛋白转导结构域PTD是一种能够把生理状态下不能进入细胞发挥生物学效应的物质带入细胞内的载体工具，其核心序列为YARAAARQARA。PTD与其他蛋白融合表达，可使生物大分子以非受体依赖方式进入细胞，具有转运过程不需要能量、转运效率高、外源蛋白质生物活性不受影响等优点。

发明内容

本发明公开一种耐高温、带PTD的突变型SOD：

所述突变型SOD的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID NO.3所示，所述PTD的氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO.4所示，所述突变型SOD的编码基因序列为序列表中的SEQ IDNO.1所示，所述PTD的基因序列为序列表中SEQ ID NO.2所示。

序列表中的SEQ ID NO.1基因序列为：

序列表中的SEQ ID NO.2PTD基因序列为：

TACGCGCGTGCGGCGGCGCGTCAGGCGCGTGCG。

序列表中的SEQ ID NO.3氨基酸序列为：

序列表中的SEQ ID NO.4PTD氨基酸序列为：YARAAARQARA。

上述新的耐高温、易穿过细胞膜的带PTD的突变型SOD(简称PTD-SOD-MUTANT)，由蛋白转导结构域PTD和嗜热菌HB27来源的SOD组成的融合蛋白，其中SOD氨基酸序列发生I28L和D108A双突变，即将第28位Ile突变为Leu，第108位Asp突变为Ala。