[发明专利]小麦静息巯基氧化酶在改善乳剂型特医食品稳定性中的应用

权利要求书

1.一种应用重组小麦静息巯基氧化酶改善乳剂型特医食品稳定性的方法，其特征在于：将重组小麦静息巯基氧化酶、蛋白质、碳水化合物、油脂、复合维生素、复合矿物质和水混合，经匀浆、催化、均质、灭菌得到乳剂型特医食品；所述的小麦静息巯基氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述的重组小麦静息巯基氧化酶的添加水平为蛋白质基的0.01%～0.5%w/w；

各组分添加量为：蛋白质1.0～10.0%w/w，碳水化合物5.0～20.0%w/w，油脂2.0～12.0%w/w，复合维生素0.1～1.0%w/w，复合矿物质0.5～2.0%w/w，余量为去除重组小麦静息巯基氧化酶的用量后的水。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于

所述的小麦静息巯基氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的第28-480位氨基酸所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括如下具体步骤：

（1）称量：蛋白质1.0～10.0%w/w，碳水化合物5.0～20.0%w/w，油脂2.0～12.0%w/w，复合维生素0.1～1.0%w/w，复合矿物质0.5～2.0%w/w，重组小麦静息巯基氧化酶为蛋白质基的0.01%～0.5%w/w，水余量；

（2）匀浆：去除重组小麦静息巯基氧化酶和油脂后，将上述其余材料混合，使用匀浆机以8000～12000r/min的速度搅拌混合，搅拌过程中缓慢加入油脂，继续匀浆5～10min，得到充分乳化的乳液；

（3）催化：将重组小麦静息巯基氧化酶添加到乳液中催化蛋白质交联，反应温度为30～50℃，摇床转速为100～200r/min；

（4）均质：将酶处理后的乳液进行高压均质，均质条件为10～50MPa，循环次数2～5次；

（5）杀菌：将均质后的乳液置于110～130℃，杀菌10～30分钟，得到乳剂型特医食品。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：

所述的重组小麦静息巯基氧化酶的制备方法，采用大肠杆菌表达体系表达，并采用柱层析方法纯化重组wQSOX蛋白；按照wQSOX：FAD=1：1～5的摩尔比添加FAD到纯化的重组wQSOX蛋白溶液中，获得具有巯基氧化活性的重组小麦静息巯基氧化酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述的重组小麦静息巯基氧化酶的制备方法，包括如下步骤：

（1）利用全基因合成技术，合成了小麦静息巯基氧化酶的全基因序列，利用引物F和引物P进行PCR扩增；将纯化得到的目的基因片段连接至载体质粒pMAL-c5x上，酶切位点为NdeI和BamHI，构建出了小麦静息巯基氧化酶重组表达质粒pMAL-c5x-wQSOX；

引物F：5′-GGCCCATATGCTCCGGTCGCTCGGCGTCG-3′，其中，下划线部分为NdeI限制性酶切位点；

引物P：5′-CCCCTAGGTCTTGCAGCATGTGAGGAG-3′；其中，下划线部分为BamHI限制性酶切位点；

（2）将重组表达质粒pMAL-c5x-wQSOX转入到大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞中，得到重组表达菌；将重组表达菌接种到LB液体培养基培养至OD₆₀₀达到0.6～0.8，在16～37℃条件下添加0.1～1.0 mM IPTG诱导重组蛋白表达4～20小时后收集菌体；

（3）收集的菌体经冰浴超声破碎后，离心收集上清液，利用Ni-NTA纯化重组小麦静息巯基氧化酶蛋白；

（4）按照wQSOX：FAD=1：1～5的摩尔比添加FAD到纯化的重组小麦静息巯基氧化酶蛋白溶液中，低温孵育过夜，经透析脱盐处理去除多余的FAD，获得具有巯基氧化活性的重组小麦静息巯基氧化酶。