[发明专利]一种土贝母药材UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法

说明书

本发明涉及一种土贝母药材UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法，所述的土贝母药材的成分含量测定方法，包括如下步骤：（1）分别吸取对照品溶液和待测土贝母药材样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定相应峰面积；（2）通过外标法计算土贝母苷甲的含量；（3）再通过一测多评法计算土贝母苷乙、土贝母苷丙的含量。本发明通过构建土贝母药材的UPLC特征图谱，测定峰面积，采用外标法计算出土贝母苷甲的含量，再通过一测多评计算出土贝母苷乙、土贝母苷丙的含量，从根本上快速、准确地对土贝母进行定量定性分析，具有一定的特征性，本发明所述的方法快速、稳定且专属性强，基线平稳，为土贝母药材质量控制提供科学的新方法。

技术领域

本发明属于中药鉴别领域，具体涉及一种土贝母药材UPLC特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法。

背景技术

土贝母俗称野瓜蒌，也称假贝母、草贝母、地苦胆等，原载于清代赵氏所编的《本草纲目拾遗》，2015年版《中国药典》规定土贝母为葫芦科植物土贝母的干燥块茎，广泛分布于河北、山西、山东、河南、湖北、湖南等地。文献报道，目前从土贝母中分离得到多种皂苷类、甾醇及其苷类、酯类、生物碱、黄酮类等成分，其中皂苷类为土贝母的主要活性成分。现代药理研究表明，土贝母具有抗炎、消肿、抗病毒、抗白血病、免疫抑制和杀精作用等。

2015年版《中国药典》仅以土贝母苷甲作为含量测定指标，由于中药有效成分多样性及复杂性，单一成分的含量测定难以全面反映药材的内在质量，且亦缺乏专属性。中药指纹/特征图谱能够提供更为全面、丰富的信息，因此常用于中药材的质量控制研究；一测多评法是借助相对校正因子，只需测定1个成分（内参物）即可实现对多个成分的含量测定，鉴于大多中药对照品制备困难，价格昂贵，或易于分解等因素难以获得，一测多评法能有效解决以上难题，在中药成分分析中逐渐得以广泛应用。目前文献关于土贝母的指纹/特征图谱和含量测定研究均采用高效液相色谱法（HPLC法），该方法用时时间长，灵敏度低、分离能力有限，已经不能很好的解决复杂中药分析过程中的实际问题。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种土贝母药材UPLC特征图谱构建方法及其成分含量测定方法，采用外标法计算出了土贝母苷甲的含量，再通过一测多评法计算土贝母苷乙、土贝母苷丙的含量，该方法快速、稳定且专属性强，能够更全面的反映土贝母药材的特征和质量，为土贝母药材质量控制提供科学的新方法。

本发明所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：

一种土贝母药材UPLC特征图谱的构建方法，包含如下步骤：

（1）精密称取土贝母药材粉末，制备得到土贝母药材供试品溶液；

（2）将土贝母药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到土贝母药材UPLC特征图谱。

作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：采用规格为2.1×100mm，1.6μm的Waters Cortecs T3色谱柱，以乙腈为流动相A，以0.05~0.15%的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，柱温为20~40℃；流速为0.2~0.4ml/min；检测波长为180~220nm，进样量为0.5~1.5µl。

作为一种优选方案，所述梯度洗脱条件为：0~4min，流动相A的体积分数变化为5%~11%，流动相B的体积分数为95%~89%；4~7min，流动相A的体积分数变化为11%~20%，流动相B的体积分数变化为89%~80%；7~21min，流动相A的体积分数变化为20%~28%，流动相B的体积分数变化为80%~72%；21~30min，流动相A的体积分数变化为28%~32%，流动相B的体积分数变化为72%~68%；30~33min，流动相A的体积分数变化为32%~35%，流动相B的体积分数变化为68%~65%；33~38min，流动相A的体积分数为35%，流动相B的体积分数为65%。