[发明专利]一种细胞松弛素类化合物的制备方法和应用

说明书

本发明提供一种细胞松弛素类化合物的制备方法和应用，属于药物化学技术领域。本发明中细胞松弛素类化合物是指细胞松弛素C和D，是通过广豆根内生真菌炭角菌GDGJ‑368接种在大米培养基中发酵，将发酵液通过硅胶柱层析分离得到，所述炭角菌GDGJ‑368的保藏号为CCTCC M2019951。本发明为细胞松弛素C和D的制备增添了一种新的制备方法，对于细胞松弛素类化合物的开发利用，具有积极意义。所得的细胞松弛素C和D对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、乙型溶血性链球菌和巨大芽孢杆菌具有抗菌活性，可以应用于制备抗菌药物。

【技术领域】

本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种细胞松弛素类化合物的制备方法和应用。

【背景技术】

细胞松弛素，又称为植物抗毒素，是氨基酸/聚酮的杂合体，是一类结构独特新颖，且具有非常好的抗菌、抑制HIV、病毒、抗肿瘤、植物毒性等活性天然活性化合物。细胞松弛素类化合物可以从真菌的代谢产物中分离获得，但是由于含量较低，得率较少，影响了该类化合物的开发应用。细胞松弛素C和D属于细胞松弛素类化合物，目前尚无获得该化合物的适宜的工业生产方法。真菌GDGJ-368为炭角属Xylaria sp.真菌，从槐属植物广豆根(Sophora tonkinensis)的叶中分离得到。通过真菌发酵，从GDGJ-368真菌的代谢产物中获得大量细胞松弛素C和D，对于细胞松弛素类化合物的开发利用，具有积极意义。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种细胞松弛素类化合物的制备方法和应用，首次从通过工业生产的方法获得细胞松弛素C和D，对于细胞松弛素类化合物的开发利用，具有积极意义。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种细胞松弛素类化合物的制备方法，所述细胞松弛素类化合物为细胞松弛素C和细胞松弛素D，是通过广豆根内生真菌炭角菌GDGJ-368发酵得到，所述炭角菌GDGJ-368保藏在位于武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC M2019951，保藏日期为2019年11月19日。细胞松弛素C和细胞松弛素D和的结构式分别为下式1和下式2：

本发明中，优选地，所述细胞松弛素类化合物是通过将炭角菌GDGJ-368接种在大米培养基中发酵，将发酵液通过硅胶柱层析分离得到的。

本发明中，优选地，细胞松弛素类化合物的制备方法具体包括以下步骤：

(1)配制种子培养基，将所述炭角菌GDGJ-368接种到PDA平板培养基，培养后得到种子培养基；

(2)将步骤(1)得到的种子培养基切割后接种至灭菌后的大米培养基中发酵，发酵培养得发酵物，而后将发酵物用有机溶剂浸泡提取，减压浓缩之后得到粗浸膏；

(3)步骤(2)得到的粗浸膏经过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，所述石油醚-乙酸乙酯梯度范围为：10:0、9:1、7:3、5:5、3:7、0:10；合并7:3和5:5梯度洗脱得到的馏分，浓缩后经反相C18柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析，再进行重结晶，即得到细胞松弛素C和细胞松弛素D。

以上步骤中，优选地，所述PDA平板培养基主要由以下原料制成：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉15～20g/L；培养条件为28℃恒温培养4-6天。

优选地，步骤(2)中所述的发酵条件为，在每个大米培养基中接种一块蚕豆大小的菌体，室温条件下静置培养25-50天；所述大米培养基中所含的组分包括：大米50-90g，蒸馏水120-150mL。

优选地，步骤(2)中所述的发酵物为固体，所述有机溶剂为乙酸乙酯，提取次数为1-5次，将每次的提取液合并后减压浓缩得到粗浸膏。