[发明专利]一种血清C1q补体的检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2包括缓冲液、保存液和胶乳微球抗体偶联物，其中缓冲液的主要成分及浓度包括：

第二缓冲液A 30-100mmol/L

保存液的主要成分及浓度包括：

第二缓冲液B 1.2-9.8g/L

稳定剂 1.0-4.0g/L

防腐剂 0.8-2.0ml/L

胶乳微球抗体偶联物的主要成分及浓度

2.根据权利要求1所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液、GOOD’S缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。

3.根据权利要求1所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中的第二缓冲液A、第二缓冲液B为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或两种以上混合物。

4.根据权利要求1或2所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂R1、R2中的防腐剂分别为叠氮钠、Proclin950、Proclin300、硫柳汞中的一种或两种以上混合物。

5.根据权利要求3所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：试剂R1中的表面活性剂A、B分别为曲拉通、吐温20、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基三甲基甜菜碱、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或两种以上的混合物。

6.根据权利要求5所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中胶乳微球的粒径为90-270nm，其表面修饰集团为羧基、羟基、醛基、氨基中的一种。

7.根据权利要求5或6所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1。

8.根据权利要求5所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂A为十二烷基硫酸钠，表面活性剂B为曲拉通。

9.根据权利要求2所述的一种血清C1q补体的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一缓冲液为三羟甲基氨基甲烷，所述试剂R2中的第二缓冲液A为2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，第二缓冲液B为甘氨酸。

10.如权利要求1-9任一项的血清C1q补体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，

(1)、试剂R1制备

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入第一缓冲液、表面活性剂A、稳定剂、表面活性剂B、抗坏血酸氧化酶、亚铁氰化钾、亚硝酸钠和防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-9.50之间，最后定容至最终体积，配制好的溶液存放在成品罐中，进行标识；

(2)、试剂R2制备

(2-1)、缓冲液配制

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，按照权利要求1的浓度要求边搅拌边投入第二缓冲液A，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到4.30-6.00之间，继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，定容后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

(2-2)、保存液配制

在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌器至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入第二缓冲液B、稳定剂、防腐剂，搅拌5-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.30-8.50之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，定容后的溶液存放备用，进行标识；

(2-3)、胶乳微球抗体偶联物的制备

将胶乳微球用缓冲液稀释到0.5-2.0％的浓度，与链霉亲和素按一定比例结合，将血清C1q补体抗体用缓冲液稀释到0.02-1.0g/L的浓度,与生物素按一定比例结合后，加入到含有链霉亲和素的微球中，混匀，控制生物素结合血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，链霉亲和素结合生物素-血清C1q补体抗体比例为1:1-4:1，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐用缓冲液溶解到0.005-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应30分钟，将混合液以14000rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗3次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。