[发明专利]一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂、检测方法及应用

权利要求书

1.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂，其特征在于：所述试剂包括三套引物探针组合；

第一套引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.1所示序列，反向引物为Seq ID No.2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列；

第二套引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.4所示序列，反向引物为Seq ID No.5所示序列，探针为Seq ID No.6所示序列；

第三套引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.7所示序列，反向引物为Seq ID No.8所示序列，探针为Seq ID No.9所示序列；

Seq ID No.1：5’-AACGCGTTCGCTTTTCG-3’

Seq ID No.2：5’-CATCGTGGTGGTTATTGTTGGT-3’

Seq ID No.3：5’-ACGTGTCCATAAAACGCAGGTGACCC-3’

Seq ID No.4：5’-GGGTTCGGATACAGGCGTTA-3’

Seq ID No.5：5’-CGTGTTCCTGCCGTGTATCTAA-3’

Seq ID No.6：5’-CCTCCCAGTTCCGCACACAGCC-3’

Seq ID No.7：5’-GAAGAACAATGTCAGCATGATGA-3’

Seq ID No.8：5’-ACTGTAAGGCTTAGGAAGTAATGGTT-3’

Seq ID No.9：5’-ACCACTTCCATACATGAACCATCTCCCA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的第一套引物探针组合的探针、Seq ID No.6所示序列的第二套引物探针组合的探针，及Seq ID No.9所示序列的第三套引物探针组合的探针，三条探针的5’端修饰不同的荧光基团，3’末端修饰荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述Seq ID No.3所示序列的第一套引物探针组合的探针中，5’端修饰6-FAM，3’末端修饰BHQ1；所述Seq ID No.6所示序列的第二套引物探针组合的探针中，5’端修饰Cy5，3’末端修饰BHQ2；所述Seq ID No.9所示序列的第三套引物探针组合的探针中，5’端修饰VIC，3’末端修饰BHQ1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂在制备非洲猪瘟基因缺失疫苗检测的试剂盒或基因芯片中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述非洲猪瘟基因缺失疫苗为MGF_360-14L基因和/或CD2v(EP402R)基因缺失的非洲猪瘟疫苗。

5.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有权利要求1或2所述的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有用于实时荧光PCR的试剂。

7.一种非洲猪瘟基因缺失疫苗的检测方法，其特征在于：包括采用权利要求1或2所述的试剂，或者权利要求5或6所述的试剂盒，对待测样品进行实时荧光PCR检测，根据检测结果判断是否为非洲猪瘟基因缺失疫苗。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述实时荧光PCR检测为三重实时荧光PCR检测，所述判断是否为非洲猪瘟基因缺失疫苗的具体方法为，第一套引物探针组合、第二套引物探针组合和第三套引物探针组合都有扩增信号，则判断为野毒株；第一套引物探针组合有扩增信号，而第二套引物探针组合和第三套引物探针组合中的至少一个没有扩增信号，则判断为非洲猪瘟基因缺失疫苗。