[发明专利]一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂、检测方法及应用

说明书

本申请公开了一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂、检测方法及应用。本申请的试剂包括三套引物探针组合；第一套引物探针组合的正反向引物和探针依序为Seq ID No.1‑3所示序列；第二套引物探针组合的正反向引物和探针依序为Seq ID No.4‑6所示序列；第三套引物探针组合的正反向引物和探针依序为Seq ID No.7‑9所示序列；三条探针的5’端修饰不同的荧光基团，3’末端修饰荧光淬灭基团。本申请的试剂，采用三套引物探针组合能在同一反应鉴别不同的基因缺失疫苗，为非洲猪瘟疫苗的快速鉴别提供了特异、灵敏的检测试剂，为防止非洲猪瘟病毒传播提供了有力的科学工具，对非洲猪瘟疫情的有效防控具有重要意义。

技术领域

本申请涉及非洲猪瘟疫苗检测领域，特别是涉及一种鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂、检测方法及应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus，ASFV)引起的家猪、野猪的一种急性、烈性、高度接触性动物传染病，所有品种和年龄的猪均可感染，发病率和死亡率最高可达100％。虽然非洲猪瘟不是人畜共患病，但该病对养猪业危害巨大，一旦发生疫情很难短期内根除，是世界范围内养猪业重点防范的疫病。世界动物卫生组织(OIE)将非洲猪瘟列为法定报告疫病，我国将其列为一类动物疫病。

非洲猪瘟自1921年首次发生至今以已有近百年历史，全球共有62个国家先后发生非洲猪瘟疫情。2018年8月，我国辽宁省首次发生非洲猪瘟疫情，截至2019年4月4日，全国共有29个省份先后发生118起非洲猪瘟疫情，其中115起是生猪的疫情，3起是野猪的疫情，累计扑杀生猪近百万头。2018年非洲猪瘟疫情在全球也较活跃，全球共有俄罗斯、罗马尼亚、波兰等25个国家发生6500多起疫情，部分国家呈现大暴发、大流行态势。在62个已发生过非洲猪瘟疫情的国家中，只有13个国家根除了疫情，根除时间多为5至36年，耗费了大量人力、物力和财力。俄罗斯从2007年首次发生非洲猪瘟至今共发生疫情超过1000起，但仍没有得到有效控制。我国既是养猪大国，也是猪肉消费大国，猪肉年消费量超过5000万吨，非洲猪瘟疫情的防控成效对我国社会和谐稳定及养猪业的发展至关重要。

由于我国传统养殖结构如养殖规模化程度低、生猪调运频次高、范围大，结合已有动物疫病防控的成功经验，疫苗是防控非洲猪瘟疫情最为有效和经济的方法。然而，截至目前，包括中国在内的全世界各国还没有一个批准上市销售使用的非洲猪瘟疫苗，养殖场/户都期盼安全、有效的疫苗尽快上市。

采用分子生物学方法，敲除病毒功能基因、病毒毒力基因或者免疫抑制基因，可降低病毒毒力或增加机体对病毒的免疫应答，研制比传统弱毒疫苗安全性更好且效力更高的基因缺失减毒活疫苗是非洲猪瘟疫苗研究重要的方向之一。国外已有非洲猪瘟基因缺失病毒的研究，比如O’DonnellV等报道的，删除多基因家族MGF360和MGF505的致弱病毒能够引起机体对亲本毒株攻毒的保护。研究表明这类基因改造的疫苗可以提供更广泛的免疫保护，比如JENSON JS等报道的缺失了CD2v/EP402R基因的BA71(I型分离株)，其不仅可以对亲本株产生免疫保护，而且对同属I型的E75株，以及来自Ⅱ型的Georgia07株都能产生保护作用。与此同时，我国科研人员也已开展MGF360-505R基因缺失和CD2v与MGF360-505R联合缺失的基因缺失病毒的研究。

虽然，目前国内外都尚未有批准上市销售使用的非洲猪瘟疫苗；但是，目前的研究显示，非洲猪瘟基因缺失疫苗是最有可能且最有前景的非洲猪瘟疫苗。因此，在可以预见的未来，如何有效的区分非洲猪瘟基因缺失疫苗和感染致病的野毒株，势必严重干扰非洲猪瘟防控。因此亟需一种可鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗和野毒株的检测方法和试剂，为后续非洲猪瘟基因缺失疫苗的推广应用提供技术支持，这对非洲猪瘟的有效防控具有重要的意义。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的鉴别非洲猪瘟基因缺失疫苗的试剂、检测方法及应用。

本申请采用了以下技术方案：