[发明专利]一种检测6-单乙酰吗啡的试纸条及其制备方法和应用方法

权利要求书

1.基于时间分辨荧光微球标记抗体的一种检测6-单乙酰吗啡的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；其特征在于：所述结合物释放垫上喷涂有时间分辨荧光微球标记的抗体；所述反应膜上包被有半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和羊抗鼠二抗的质控线。

2.根据权利要求1所诉的试纸条，其特征在于：所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫均粘贴在底板上，且其中任意相邻两个沿上下方向部分叠加。

3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于：所述结合物释放垫的1/3-1/2被覆盖于样品吸收垫下。

4.根据权利要求1-3任一所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的激发波长为300-400nm，发射波长为500-700nm。

5.根据权利要求1-4任一所述的试纸条，其特征在于：所述时间分辨荧光微球是将直径为100nm-500nm的稀土离子作为标记物，时间分辨荧光微球表面修饰有功能基团，用于蛋白、抗体和核酸的共价偶联。

6.根据权利要求1-5任一所述的试纸条，其特征在于：所述结合物释放垫为玻璃纤维或聚酯材料。

7.根据权利要求1-6任一所述的试纸条，其特征在于：所述反应膜为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

8.根据权利要求1-7任一所述的试纸条，其特征在于：检测的样本包括：毛发、血液、唾液、尿液或其他生物样本。

9.根据权利要求8所述的试纸条，其特征在于：检测的样品为毛发时，要对样品进行前处理，包括毛发的研磨、超声或涡旋。

10.一种制备权利要求1-9任一项所述试纸条的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)用荧光微球标记6-单乙酰吗啡抗体，并将其喷涂在结合物释放垫上，以制备喷涂有6-单乙酰吗啡单克隆抗体-荧光微球标记物的结合物释放垫；

2)将半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠二抗分别喷涂于反应膜上作为检测线(T)和质控线(C)；

3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

11.根据权利要求10所述的制备试纸条的方法，其特征在于：在步骤1)中取出荧光微球进行活化，然后加入6-单乙酰吗啡抗体进行共价偶联，结束后加入封闭缓冲液进行封闭，离心洗涤后放置于4℃保存备用。

12.根据权利要求10或11所述的制备试纸条的方法，其特征在于，在步骤1)中的结合物释放垫，先用缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h，置于干燥环境中保存，再用于喷涂标记的抗体。所述缓冲液是pH为7.4的0.02-0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，其中含0.2-1％的牛血清白蛋白、0.1-5％的海藻糖和0.02-0.1％Tween-20。

13.一种应用权利要求1-9任一项所述基于时间分辨荧光微球标记抗体的检测6-单乙酰吗啡的试纸条检测样品中6-单乙酰吗啡的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)将试纸条和待测样品恢复至室温；

2)开启免疫荧光分析仪，插入对应ID卡，读取标准曲线；

3)向试纸条的样品孔中加入待测样本60-120μL，反应5-10min后，将检测卡插入免疫荧光分析仪；

4)截留在检测线和质控线的荧光微球在最佳激发光下，发出强烈的荧光条带；

5)采用免疫层析分析仪读取检测线和质控线的荧光强度，并给出T/C值，分析仪可通过内置的标准曲线计算出样品中6-单乙酰吗啡的浓度，并判断阴阳性。