[发明专利]姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法及其应用

权利要求书

1.一种姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、根尖的培养、采集和固定：种植姜花属植物植株至根长到1－1.5cm取根尖，将根尖置于预处理液中进行预处理，再用水漂洗后加入固定液固定得到固定好的根尖；

步骤二、根尖处理制片：

a)取固定好的根尖0.2-0.3cm左右，双蒸水清洗，再用柠檬酸缓冲液冲洗的导清洗后的根尖；

b)酶解：清洗后的根尖用质量分数4％的纤维素酶、0.6％的果胶酶和3％的离析酶的混合液28℃下酶解4h然后转入4℃冰箱酶解过夜；

c)后低渗：吸出混合液，用双蒸水冲洗根尖，再用双蒸水浸泡根尖；

d)再固定：吸出水，然后加入固定液再固定根尖；

e)制片：取一个根尖于干净的载玻片上，滴一滴固定液，用工具将根尖挤压至糊状，然后滴2-3滴固定液，涂开，使根尖分散；酒精灯上烤至着火，待火自然熄灭，冷却即可得到染色体装片。

2.如权利要求1所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法，其特征在于，步骤e)中，若有未成糊状的根尖，则夹出，弃之不用。

3.如权利要求1所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法，其特征在于，还包括步骤三、保存将染色体装片经空气干燥后，置于-20℃贮存备用。

4.如权利要求1所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法，其特征在于，所述步骤一包括如下步骤：

一)将姜花属植物植株移至装有腐殖土与椰糠质量比8:2的套盆中，于室外树下培养；套盆的内盆有排水孔，外盆正常；

二)在移栽后2周后初次取根，以后每次取根间隔1周，取根时将外盆取出，即可取下从内盆排水孔伸出来的根尖，其中取根长到1－1.5cm时的根尖；

三)将取下的根尖先置于装有双蒸水的样品瓶里漂洗5分钟，将双蒸水吸出加入预处理液，饱和的α-溴代萘溶液；盖上瓶盖，贴上标签，室温下处理45分钟。再吸出预处理液，用双蒸水漂洗2次5分钟，然后再吸出双蒸水加入固定液，放置于4℃冰箱内过夜；所述固定液包括3体积份的甲醇和1体积份的冰醋酸。

5.如权利要求1所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法，其特征在于，所述步骤二包括如下步骤：

a.根尖的切取和清洗：用刀片取固定好的根尖0.2-0.3cm处的根尖生长点左右，双蒸水洗4次，每次5min，再用pH4.5的柠檬酸缓冲液洗3次，每次5分钟；

b.酶解：用质量分数4％的纤维素酶、0.6％的果胶酶和3％的离析酶的混合液在28℃下酶解4h，然后转入4℃冰箱酶解过夜；

c.后低渗：吸出酶液，用双蒸水冲洗根尖1-2次，再用双蒸水浸泡2min；

d.再固定：吸出水，加入固定液再固定材料；

e.制片：吸出1个根尖生长点于干净的载玻片上，滴一滴固定液，用镊子先轻轻挤压材料至糊状，滴2-3滴固定液，迅速涂开，使材料分散，火烤至着火，得到染色体装片。

6.一种权利要求1-5任一所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法制得的染色体装片的用途，其特征在于，所述染色体装片用于复合染料染色显带或荧光原位杂交实验。

7.如权利要求6所述的姜花属植物根尖细胞染色体中期分裂相装片的方法制得的染色体装片的用途，其特征在于，所述复合染料染色显带包括CPD染色；所述荧光原位杂交实验包括FISH杂交实验和45S rDNA FISH杂交实验。