[发明专利]突变的L-氨基酸连接酶以及酶催化法制备L-谷氨酸-L-色氨酸二肽的工艺有效
| 申请号： | 201911228766.4 | 申请日： | 2019-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN110777123B | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 于铁妹;黄俊华;刘文龙;潘俊锋;刘建 | 申请（专利权）人： | 深圳瑞德林生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12P21/02;C12R1/125 |
| 代理公司： | 深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙) 44285 | 代理人： | 王兆林 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区粤海街道麻*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变 氨基酸 连接酶 以及 催化 法制 谷氨酸 色氨酸 二肽 工艺 | ||
1. 一种突变的L-氨基酸连接酶，其特征在于，在SEQ ID NO:1所示序列的野生型L-氨基酸连接酶基础上仅有H276G、W332K、M334D、L12A、Y75S和W76L的位点突变；或者仅有H276S、W332N、M334S 、L12S、Y75G和W76V的位点突变。
2.权利要求1所述突变的L-氨基酸连接酶在催化L-谷氨酸及L-色氨酸生成L-谷氨酸-L-色氨酸二肽中的应用或在制备催化L-谷氨酸及L-色氨酸生成L-谷氨酸-L-色氨酸二肽的酶制剂中的应用。
3.权利要求1所述突变的L-氨基酸连接酶联合PPK和ADK或两者的融合蛋白在催化L-谷氨酸及L-色氨酸生成L-谷氨酸-L-色氨酸二肽中的应用或在制备催化L-谷氨酸及L-色氨酸生成L-谷氨酸-L-色氨酸二肽的酶制剂中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述PPK来源于
5.一种酶催化法制备L-谷氨酸-L-色氨酸二肽的工艺，其特征在于，权利要求1所述突变的L-氨基酸连接酶在其最适pH值范围内的反应介质中催化反应原料L-谷氨酸、L-色氨酸、ATP或其盐生成L-谷氨酸-L-色氨酸二肽；在反应过程中维持体系pH值在所述突变的L-氨基酸连接酶最适pH值范围内。
6.根据权利要求5所述工艺，其特征在于，所述反应介质为缓冲液。
7.根据权利要求5或6所述工艺，其特征在于，还包括添加反应原料PPK和ADK或两者融合蛋白PPK-ADK、多聚磷酸、氯化镁和氯化钾。
8.根据权利要求5-6任意一项所述工艺，其特征在于，还包括选自除蛋白杂质、除残留反应原料、除盐、除磷酸和结晶中的一种或两种以上操作的纯化步骤。
9.根据权利要求7所述工艺，其特征在于，还包括选自除蛋白杂质、除残留反应原料、除盐、除磷酸和结晶中的一种或两种以上操作的纯化步骤。
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