[发明专利]一种基于实时荧光逆转录重组酶聚合酶核酸扩增技术检测SADS-CoV的引物和试剂盒

权利要求书

1.一种基于实时荧光逆转录重组酶聚合酶核酸扩增技术检测SADS-CoV的引物和探针，其特征在于，所述引物包括上游引物F和下游引物R，所述上游引物F和下游引物R的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO：3所示。

2.权利要求1所述基于实时荧光逆转录重组酶聚合酶核酸扩增技术检测SADS-CoV的引物和探针在制备特异性检测SADS-CoV荧光RT-RPA的检测试剂中的应用，其特征在于，提取待测样品的RNA为模板，利用权利要求1所述的引物和探针进行扩增和实时荧光检测。

3.一种用于检测SADS-CoV的荧光RT-RPA试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述上游引物F、下游引物R和探针的浓度分别为10μM。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性标准品和荧光型RT-RPA试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进行荧光RT-RPA检测反应体系为：荧光型RT-RPA试剂、2μL上游引物F、2μL下游引物R、0.6μL探针Probe、RNA模板2.0μL，总体积50μL。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品的制备方法为：

S1.从SADS-CoV阳性病料中抽提RNA，利用序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5的引物经RT-PCR特异性扩增SADS-CoV N基因，得到扩增产物；

S2.回收目标片段，与载体连接，并经纯化、体外转录，获得体外转录阳性标准品TSADS-RNA。