[发明专利]一种蛋白质变体的定性定量方法

权利要求书

1.一种蛋白质变体的定性定量方法，其特征在于：利用离子液体提取生物样品中的蛋白质，进行蛋白质样品的变性、还原、烷基化处理，在进行酶切时，利用具有不同酶切位点的蛋白酶将蛋白质酶解成肽段；进一步对肽段进行二维分离，并利用液质联用系统进行数据采集；利用蛋白质组定量方法提取谱图中所有肽段的定量信息，接着筛选不同蛋白质变体的特征性肽段的定量信息，进而得到蛋白质变体的定量信息。

2.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：离子液体提取液为含有碳链长度三到三十个烷基的咪唑、季铵、吡啶盐中的一种或两种以上的组合。

3.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：具有不同酶切位点的蛋白酶包括胰蛋白酶、Lys-C酶、Lys-N酶、Glu-C酶、Arg-C酶、Asp-N酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、蛋白酶K中的两种或三种以上；

酶切方法为将样品平均分为两份或三份以上，在每份样品中分别加入一种或二种以上不同蛋白酶进行酶切；或在蛋白质样品中同时或依次加入两种或三种以上的不同蛋白酶。

4.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：蛋白质变体的特征性肽段为在蛋白质组数据库中同一蛋白质对应的不同变体，变体所特有的氨基酸序列经过酶切之后所产生的肽段，且该肽段也在蛋白质数据库内特异性的指向该蛋白质变体。

5.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：使用的蛋白质组定量方法包括无标定量方法(Label free quantitation)、准等重二甲基化定量方法(pIDL、m-pIDL)、代谢标记定量方法(SILAC、NeuCode SILAC)、二甲基化标记定量方法、报告离子定量方法(iTRAQ、TMT、DiLeu)、等重标记方法(IPTL)、NeuCode labeling方法、SWATH方法中的一种或二种以上。

6.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：二维分离所用的色谱模式第二维使用酸性条件下的反相色谱分离，第一维分离利用碱性条件下的反相色谱、强阳离子交换色谱、强阴离子交换色谱、体积排阻色谱、毛细管电色谱中的一种。

7.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：所述的液质联用中的质谱仪包括静电场轨道阱(Orbitrap)、飞行时间管(TOF)或傅立叶变换离子回旋共振质量分析器(FT-ICR)。

8.按照权利要求1所述的定量方法，其特征在于：所述的生物样品为人、动物或植物的细胞、组织、器官、体液、以及微生物中的一种或二种以上。