[发明专利]胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法

权利要求书

1.一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：将供试品溶液经体积排阻色谱法联合紫外检测法进行检测，即可；

所述的体积排阻色谱法中的洗脱液包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为含有卤素离子的三氟乙酸水溶液，所述流动相A的pH值为1.7~2.1；所述的流动相A中，所述的卤素离子的浓度为3~8mM，不包括8mM；所述的流动相B为腈类溶剂；所述的卤素离子为氯离子和/或溴离子；所述的体积排阻色谱法中的色谱柱为TSK gel G2000SWXL色谱柱；所述的体积排阻色谱法中的洗脱方式为等度洗脱；所述流动相A与所述流动相B的体积比为51:49~50:50。

2.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，

所述的流动相A的pH为1.8~2.0；

和/或，所述的流动相A为含有氯离子的三氟乙酸水溶液；

和/或，所述的卤素离子的浓度为3~4mM；

和/或，所述的腈类溶剂为乙腈。

3.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的流动相A的pH为1.9。

4.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，当卤素离子为氯离子时，所述的氯离子来源于盐酸、氯化钾和氯化钠中的一种或多种；

当卤素离子为溴离子时，所述的溴离子来源于溴化钾和/或溴化钠。

5.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的供试品溶液在进样前进行过滤处理；

和/或，所述的供试品溶液中的溶剂为“pH为1.7~1.9的硫酸水溶液”和/或乙腈；

和/或，所述的供试品溶液中的供试品为含有“胰蛋白酶和/或胰蛋白酶原”的原料药或制剂；

和/或，所述的供试品溶液中供试品的浓度为0.1~1.0mg/mL；

和/或，所述的供试品溶液中胰蛋白酶及其酶原的浓度为39.70μg/mL~794.0μg/mL。

6.如权利要求5所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，当所述的供试品溶液中的溶剂为“pH为1.7~1.9的硫酸水溶液”和乙腈的混合液时，硫酸水溶液与乙腈的体积比为100：0~35：65；

和/或，所述过滤处理采用的微孔滤膜的膜孔径为0.22μm。

7.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的色谱柱的填料颗粒度为3~5μm；

和/或，所述的色谱柱的长度为300~600mm；

和/或，所述的色谱柱的内径为1.0~7.8mm。

8.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的色谱柱的填料颗粒度为5μm。

9.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的色谱柱的长度为300mm或250mm。

10.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的色谱柱的内径为7.8mm或4.6mm。

11.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的体积排阻色谱法的进样体积为0.1~100μL；

和/或，所述的体积排阻色谱法中的柱温为20~30℃；

和/或，所述的体积排阻色谱法中的样品室温度为10~15℃。

12.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的体积排阻色谱法的进样体积为20μL。

13.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的洗脱液的流速为0.35~0.8mL/min。