[发明专利]一种同时检测酶促反应液中甘氨酸和丝氨酸的方法

权利要求书

1.一种同时检测酶促反应液中甘氨酸和丝氨酸的方法，其特征在于，所述方法采用高效液相色谱法，将酶促反应液注入高效液相色谱仪中，采用C18柱分离，紫外吸收检测器进行检测；

所述高效液相色谱法的流动相A为0.01～0.1mol/L磷酸氢二钾和0.001～0.01mol/L癸烷磺酸钠的混合溶液，pH值为1～5；所述高效液相色谱法的流动相B为无水乙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为0.05mol/L磷酸氢二钾和0.005mol/L癸烷磺酸钠的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A的pH值为2.3。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A和所述流动相B的体积比为1000：50～1000：90，优选为1000：70。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A中还含有pH值调节剂，所述pH值调节剂优选盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸的至少一种。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件为：柱温为20～40℃、检测波长为190～230nm、流速为0.8～1.5mL/min、进样量为5～20μL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱条件为：柱温为25～35℃，优选为30℃，检测波长为200～220nm，优选为210nm，样品流速为0.8～1mL/min，优选为1mL/min，进样量为8～15μL，优选为10μL。

8.根据权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法至少包括以下步骤：

(1)配制混合对照品溶液：所述混合对照品溶液中甘氨酸对照品的浓度为0.1～5g/L、丝氨酸对照品的浓度为0.1～5g/L；

(2)配制供试品溶液：将待测酶促反应液稀释至浓度为0.1～5g/L，作为供试品溶液；

(3)检测：分别取所述混合对照品溶液和所述供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，采用C18柱分离，利用紫外检测器检测到分离的甘氨酸吸收峰和丝氨酸吸收峰，通过外标法计算得到所述待测酶促反应液中甘氨酸、丝氨酸的含量。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，分别配制甘氨酸对照品贮备溶液、丝氨酸对照品贮备溶液，检测前分别取所述甘氨酸对照品贮备溶液和所述丝氨酸对照品贮备溶液进行混合，用蒸馏水稀释，得到所述混合对照品溶液；

所述甘氨酸对照品贮备溶液的配制方法优选为：称取甘氨酸对照品，用蒸馏水稀释，得到浓度为1～10g/L的甘氨酸对照品贮备溶液；

所述丝氨酸对照品贮备溶液的配制方法优选为：称取丝氨酸对照品，用蒸馏水稀释，得到浓度为1～10g/L的丝氨酸对照品贮备溶液。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，将所述待测酶促反应液稀释后进行过滤，所述过滤为采用0.45μm水系滤膜过滤。