[发明专利]一种可检测SNP的新型CPA方法、引物组和试剂盒

权利要求书

1.一种可检测SNP的新型CPA方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取DNA为待检测模板；

(2)设计交叉引物组，所述交叉引物上设计与该DNA突变位点相结合的RNA碱基；

(3)建立反应体系，所述反应体系中包含RnaseHⅡ酶，将待检测模板加入到反应体系中进行扩增，当交叉引物与DNA突变位点相结合时，激活RnaseHⅡ酶发生切割，使扩增反应继续进行，当交叉引物与DNA突变位点不能结合时，扩增反应无法进行；

(4)判断反应物中是否具有目标DNA。

2.根据权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述步骤(4)中，以显色法检测反应物中是否具有目标DNA。

3.根据权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述交叉引物组包括引物：LoopB、B3、F3、B2和BIP。

4.根据权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述反应体系包括缓冲液、硫酸镁、dNTP、Bst酶、RnaseHⅡ酶、LoopB、B3、F3、B2和BIP。

5.根据权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法，其特征在于，所述反应体系的反应温度为61℃。

6.基于权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法的用于检测鸡白痢沙门菌的引物组，其特征在于，包括：

LoopB：5′-GCAATATTCTTATGCCTATCAGAGT-3′；

B3：5′-GGCAGTGATGTTCCACAAT-3′；

F3：5′-ACTATTGCTTGCTATGGAAGAC-3′；

B2：5′-TAACGAACCTGCAACAGCTTTAAT-3′；

BIP：

5′-TGCAACAGCTTTAATACTGCATCAAGTGATGAGATAGAC(RNA碱基)TCTAC-C3 spacer-3′；

所述引物组针对鸡白痢沙门菌rfbs基因。

7.基于权利要求1所述的可检测SNP的新型CPA方法的检测鸡白痢沙门菌的试剂盒，其特征在于，包括反应液，所述反应液包括LoopB、B3、F3、B2和BIP；

LoopB：5′-GCAATATTCTTATGCCTATCAGAGT-3′；

B3：5′-GGCAGTGATGTTCCACAAT-3′；

F3：5′-ACTATTGCTTGCTATGGAAGAC-3′；

B2：5′-TAACGAACCTGCAACAGCTTTAAT-3′；

BIP：

5′-TGCAACAGCTTTAAT-ACTGCATCAAGTGATGAGATAGAC(RNA碱基)TCTAC-C3 spacer-3′；

所述引物组针对鸡白痢沙门菌rfbs基因。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液包括缓冲液2.5μl、硫酸镁2.0μl、dNTP 2μl、Bst酶1.0μl、RnaseHⅡ酶0.1μl、LoopB+B2 1μl、B3+F3 0.5μl和BIP 3μl。