[发明专利]一种调控CAR-T特异性活化的启动子及其应用

权利要求书

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子由重复数为4的Hif1a调节元件和迷你启动子连接构成，所述Hif1α调节元件核酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，所述启动子受缺氧环境调控，所述迷你启动子选自细胞病毒启动子、HSV胸苷激酶的启动子、猿猴病毒40的启动子、腺病毒晚期启动子和合成启动子中的任一项。

3.根据权利要求1所述的启动子，其特征在于，将所述Hif1α调节元件的结构进行优化得到优化的Hif1α调节元件，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的启动子，其特征在于，所述启动子的核酸序列如SEQID NO：3所示。

5.一种包含缺氧启动子的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构包含受缺氧环境调控启动的启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3序列所示。

6.权利要求5所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的抗原识别区为ScFv，所述ScFv的氨基酸序列如SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9所示或其功能性变体。

7.根据权利要求5所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所示或其功能性变体。

8.根据权利要求5所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的跨膜区氨基酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示或其功能性变体。

9.根据权利要求5所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的胞内共刺激结构域氨基酸序列如SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示或其功能性变体。

10.根据权利要求5所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的胞内活化信号的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示或其功能性变体。

11.根据权利要求5-10任一项所述的CAR结构，其特征在于，所述CAR结构的氨基酸序列如SEQ ID NO:18-21任一所示或其功能性变体。

12.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求5-10任一项所述的CAR结构。

13.包含缺氧启动子的CAR表达载体，其特征在于，所述缺氧启动子的核苷酸序列如SEQID NO：1或SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示；所述表达载体为慢病毒表达载体、逆转录病毒表达载体、腺病毒表达载体、腺相关病毒表达载体、DNA载体，RNA载体、质粒中的任一种。

14.权利要求13所述的CAR表达载体，其特征在于，所述载体包含如SEQ ID NO:4-7任一所示的核苷酸序列。

15.一种包含权利要求15或16所述表达载体的CAR-T细胞。

16.一种提高缺氧环境下CAR-T细胞杀伤能力的方法，其特征在于，构建一种权利要求13所述的CAR结构的表达载体并感染T淋巴细胞，然后作用于靶细胞。

17.权利要求1所述的启动子或权利要求5所述的CAR结构或权利要求12所述的核酸分子或权利要求13所述的表达载体或权利要求15所述的CAR-T细胞在制备肿瘤药物中的应用。

18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为恶性肿瘤，包括急性淋巴样白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、肺癌、肾癌、肝癌、脑癌和皮肤癌；所述肿瘤高表达CD19、CD20、CD123、CD22、BCMA、ROR1、CEA、间皮素、PSCA、PSMA、c-Met、GPC-3、Her2、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1TCR、MAGE A3TCR中的一种或多种。