[发明专利]含羟脯氨酸与羟赖氨酸的重组类人胶原蛋白及其生产方法

权利要求书

1.含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白的核苷酸序列，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白，其特征在于：所述含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.一种表达重组类人胶原蛋白的克鲁维酵母，其特征在于：胞内组成型表达人源脯氨酸羟化酶α亚基，蛋白酶二硫键异构酶，以及赖氨酸羟化酶；其中，脯氨酸羟化酶α亚基的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；蛋白酶二硫键异构酶的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，氨基酸序列如SEQ ID No.7所示；赖氨酸羟化酶的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。

4.根据权利要求3所述的表达重组类人胶原蛋白的克鲁维酵母生产诱导方法，其特征在于包括以下步骤：

1)接种：将构建好的克鲁维酵母菌挑单菌落于YPD培养基中，28-30℃，100-300rpm培养约16-30h，至OD₆₀₀达到20-30范围；

2)发酵培养：将步骤1)种子液接种至发酵罐中，控制温度在28-30℃，溶氧不低于20％，pH在5.8±0.1；

3)菌体生长：待葡萄糖耗尽后，补加葡萄糖；

4)半乳糖诱导：待步骤3)中的葡萄糖消耗完后，开始补加植物来源的半乳糖，至诱导结束；

5)离心，收集发酵液上清，得重组类人胶原蛋白发酵液。

5.根据权利要求4所述的表达重组类人胶原蛋白的克鲁维酵母生产诱导方法，其特征在于：步骤3)补加0.1％-12％葡萄糖。

6.根据权利要求4所述的表达重组类人胶原蛋白的克鲁维酵母生产诱导方法，其特征在于：步骤4)补加0.1％-10％的植物来源的半乳糖。

7.根据权利要求4所述的表达重组类人胶原蛋白的克鲁维酵母生产诱导方法，其特征在于：步骤5)所述的离心为3000g-10000g离心2-30min。

8.权利要求2所述的含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白在促进细胞粘附以及促进伤口愈合中的应用。