[发明专利]一种体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法在审
| 申请号： | 201911239769.8 | 申请日： | 2019-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN112920999A | 公开（公告）日： | 2021-06-08 |
| 发明（设计）人： | 龚畅;宋尔卫;谭维格;田圳銮;梁格豪 | 申请（专利权）人： | 中山大学孙逸仙纪念医院 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘孟斌 |
| 地址： | 510120 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 培养 乳腺癌 循环 肿瘤 细胞 方法 | ||
1.一种体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的培养基，其特征在于，所述培养包括基础培养基、细胞生长因子和添加剂；所述基础培养基为DMEM-F12培养基；所述添加剂为B27(50×)。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述B27(50×)与培养基的体积比为1：50，B27(50×)的浓度为1×。
3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述细胞生长因子包括上皮细胞生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)。
4.如权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述细胞生长因子EGF的浓度为20ng/ml；FGF的浓度为20ng/ml。
5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括胎牛血清；
6.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括双抗。
7.一种体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：利用权利要求1所述的培养基体外悬浮培养乳腺癌循环肿瘤细胞CTC。
8.如权利要求7所述的体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，将分离富集的乳腺癌循环肿瘤细胞CTC接种于超低吸附的悬浮培养皿，每3天更换一半培养体积的如权利要求1所述的培养基，在培养基开始形成深色中央区之前将其传代。
9.如权利要求8所述的体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述传代的具体步骤如下：将培养的乳腺癌循环肿瘤细胞CTC重力沉降，去掉部分上清，加入胰蛋白酶-EDTA溶液，室温反应2分钟，以生成单细胞悬液，离心，弃去上清液，将细胞悬于新鲜的如权利要求1所述的培养基中，然后在新的超低吸附的悬浮培养皿上重新接种CTC细胞。
10.如权利要求7所述的体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述乳腺癌循环肿瘤CTC来源于乳腺癌患者的外周血，具体采用如下方法从乳腺癌患者的外周血获得乳腺癌循环肿瘤细胞CTC：
所述乳腺癌患者的外周血通过CellSearch外周血循环肿瘤细胞检测仪系统进行分离、富集和计数CTC；或应用CD326(EpCAM)标记的免疫磁珠特异性捕获乳腺癌外周血中的CTC。
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