[发明专利]一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法

权利要求书

1.一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采集不同湖泊地理群体的中华绒螯蟹；

2)从步骤1)中采集的中华绒螯蟹中分离蟹肉；

3)提取和测定所述蟹肉中脂肪酸的含量，得到中华绒螯蟹的脂肪酸谱数据；

所述脂肪酸包括C12:0，C14:0，C15:0，C16:0，C16:1，C17:0，C18:0，C18:1，C18:2，C18:3，C20:0，C20:1，C20:2，C20:3，C20:4，C20:5和C22:0；

4)对所述中华绒螯蟹的脂肪酸谱数据进行PCA分析和聚类分析，根据PCA分析和聚类分析的综合结果判断各中华绒螯蟹的湖泊地理群体来源地。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述湖泊地理群体包括以下湖泊中的两种或多种：阳澄湖、太湖、洪泽湖、固城湖、长荡湖和高邮湖。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述蟹肉包括从中华绒螯蟹的第2对附肢中分离得到。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，提取所述蟹肉中脂肪酸的方法包括以下步骤：

A.将所述蟹肉粉碎至肉糜，用氯仿甲醇溶液振荡提取，过滤，收集滤液；

B.将所述滤液去除有机溶剂后依次用氢氧化钠甲醇溶液和三氟化硼甲醇溶液进行水浴提取，得到提取液；

C.用正己烷和饱和氯化钠溶液对所述提取液进行振荡萃取，收集上清液，用于脂肪酸含量测定。

5.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述氯仿甲醇溶液中氯仿和甲醇的体积比为2:1；

所述振荡提取的时间为30～60min。

6.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述氢氧化钠甲醇溶液的摩尔浓度为0.5mol/L；所述三氟化硼甲醇溶液的体积百分含量为25％。

7.根据权利要求4或6所述的分析方法，其特征在于，所述水浴提取的温度为60～65℃；所述水浴提取的时间为30～35min。

8.根据权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述正己烷和饱和氯化钠溶液的体积比为1:1。

9.根据权利要求1或4所述的分析方法，其特征在于，测定所述蟹肉中脂肪酸的含量的方法采用气相色谱法进行；

所述气相色谱法的测定参数如下：

方法：GC/FID；

色谱柱：DB-WAX 30M I.D.0.32mm；

进样口温度：250℃；

检测器温度：250℃；

程序升温：起始温度100℃，保留3min；每分钟以10℃的速度升至180℃，保留1min；然后再以每分钟3℃的速度升至240℃，保留15min；

载气N₂流量：3ml/min；

燃气H₂流量：40ml/min；

助燃气流量：400ml/min；

分流比：1:10；

进样量：0.6μL。

10.根据权利要求1～6和8任意一项所述的分析方法，其特征在于，步骤1)中所述中华绒螯蟹是通过简化基因组方法进行主成分分析无法区别湖泊地理群体来源的中华绒螯蟹。