[发明专利]一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法

说明书

本发明提供了一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法，属于中华绒螯蟹分子设计育种技术领域。本发明提供的分析方法用中华绒鳌蟹中脂肪酸组分成功区分不同地理来源的中华绒螯蟹，克服了采用简化基因组测序无法区分湖泊地理群体来源的难题，也为不同地理湖泊群体的中华绒螯蟹商业价值来源提供参考资料。用这种分析方法可用于检测与市场价值有关的中华绒螯蟹的归属地问题，也可用于分析不同地理群体的遗传和环境的互作等研究。

技术领域

本发明属于中华绒螯蟹分子设计育种技术领域，具体涉及一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法。

背景技术

中华绒螯蟹肉质鲜美，含有丰富的蛋白质、较少的脂肪和碳水化合物及丰富的钙、磷、钾、钠、镁、硒等微量元素，蟹黄中的胆固醇含量较高，是餐桌上深受人们喜爱的一种滋味鲜美的水产佳肴，具有很高的食用价值、药用价值和经济价值，尤其是阳澄湖大闸蟹品牌更是文明全国。随着其经济价值的逐步提高，野生群体的捕捞量加剧了野生种的消失，因此加强不同地理湖泊群体种质资源的保护和合理利用成为急需解决的关键问题。而不同湖泊种质资源的种质鉴定成为首当其冲的问题。对于中华绒螯蟹养殖大省江苏来说更是如此，尤其是不同地理湖泊群体的市场价格差异甚大，从而出现了中华绒螯蟹洗澡的说法，因此，需要从科学的角度对这些种质进行鉴定。

当前用于种质鉴定的方法有表型鉴定、分子鉴定(诸如SNPs，微卫星， RFLP等)、基因组鉴定。申请人在采用基因组鉴定时发现，基于基因组范围的SNPs无法区分不同地理湖泊群体，表型鉴定更是难以区分，然而不同地理群体的经济价值差别深远，无法满足市场对种质鉴定的认可。因此需要一种能够准确区分来源不同地理湖泊群体中中华绒螯蟹的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种可以鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法，克服了采用简化基因组测序无法区分这些个地理群体的难题，也为不同地理湖泊群体的中华绒螯蟹商业价值来源提供参考。

本发明提供了一种用于鉴别中华绒螯蟹不同地理群体的分析方法，包括以下步骤：

1)采集不同湖泊地理群体的中华绒螯蟹；

2)从步骤1)中采集的中华绒螯蟹中分离蟹肉；

3)提取和测定所述蟹肉中脂肪酸的含量，得到中华绒螯蟹的脂肪酸谱数据；

所述脂肪酸包括C12:0，C14:0，C15:0，C16:0，C16:1，C17:0，C18:0， C18:1，C18:2，C18:3，C20:0，C20:1，C20:2，C20:3，C20:4，C20:5和C22:0；

4)对所述中华绒螯蟹的脂肪酸谱数据进行PCA分析和聚类分析，根据 PCA分析和聚类分析综合聚类结果判断各中华绒螯蟹的湖泊地理来源地。

优选的，所述湖泊地理群体包括以下湖泊中的两种或多种：阳澄湖、太湖、洪泽湖、固城湖、长荡湖和高邮湖。

优选的，所述蟹肉包括从中华绒螯蟹的第2对附肢中分离得到。

优选的，提取所述蟹肉中脂肪酸的方法包括以下步骤：

A.将所述蟹肉粉碎至肉糜，用氯仿甲醇溶液振荡提取，过滤，收集滤液；

B.将所述滤液去除有机溶剂后依次用氢氧化钠甲醇溶液和三氟化硼甲醇溶液进行水浴提取，得到提取液；

C.用正己烷和饱和氯化钠溶液对所述提取液进行振荡萃取，收集上清液，用于脂肪酸含量测定。

优选的，所述氯仿甲醇溶液中氯仿和甲醇的体积比为2:1；

所述振荡提取的时间为30～60min。

优选的，所述氢氧化钠甲醇溶液的摩尔浓度为0.5mol/L；所述三氟化硼甲醇溶液的体积百分含量为25％。