[发明专利]一种上清和沉淀协同定量的蛋白质热稳定性分析方法

权利要求书

1.一种上清和沉淀协同定量的蛋白质热稳定性分析方法，其特征在于：

利用加热沉淀后蛋白质在上清样品和沉淀样品中定量信息互补的性质筛选与配基分子有相互作用的靶蛋白；

该方法的步骤为：

(a) 蛋白质溶液分成二组以上，一组以上与含配基分子的溶剂进行孵育，作为配基组，另一组与等体积的空白溶剂进行孵育，作为空白组；

(b) 通过在44-62℃温度下加热变性引起蛋白质发生沉淀；

(c) 分离加热后的上清液和沉淀，分别进行酶解和定量蛋白质组学分析；

(d) 综合分析上清样品和沉淀样品中蛋白质的定量结果，筛选出配基分子的靶蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(a)所述的蛋白质溶液是细胞提取液，组织提取液，血液来源的蛋白质混合物或者纯化的蛋白质中的一种或二种以上；所述的蛋白质溶液必须保持蛋白质完整的天然结构，不能发生变性，应采取一些温和的提取蛋白质的方法，包括：液氮反复冻融法、液氮研磨法和匀浆法中的一种或二种以上；所用的裂解液能够维持蛋白质的结构，包括磷酸缓冲液（PBS）。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(a)所述的配基分子是活性药物、代谢物、核酸分子、金属离子、肽段、蛋白质以及其它可能与蛋白质混合物中的蛋白质发生相互作用的各类分子中的一种或二种以上。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(a)所述的蛋白质溶液被平均分为两组，其中一组加入一定终浓度的配基分子作为配基组，另一组加入等体积的空白溶剂作为空白组，进行孵育；或者步骤(a)所述的蛋白质溶液被平均分为两组以上，其中分别加入一系列不同终浓度的配基作为配基组，加入结构相似的配基或空白作为空白组。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(c)的定量蛋白质组学分析方法包括无标记定量或分别标记定量。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于：

对质谱分析得到的raw文件使用蛋白质组学分析软件进行搜库，设置相应的定量方法；对于得到的定量结果，上清样品和沉淀样品分别进行显著性检验，认为在上清样品和沉淀样品中P-value均小于0.05 的蛋白质作发生显著变化的蛋白。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

综合分析上清样品和沉淀样品中蛋白质定量信息时，将在上清样品和沉淀样品中p-value均小于0.05的蛋白挑选出来，利用蛋白质在上清样品和沉淀样品中的差异倍数绘制散点图，最后选取在上清样品中差异倍数大于0.5并且在沉淀样品中差异倍数也大于0.5的蛋白质，认为是可信的配基分子的靶蛋白。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

显著性检验方法为统计学方法。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

蛋白质在上清样品和沉淀样品中的差异倍数的阈值相同或不同。