[发明专利]核苷酸序列、通用反向引物、通用反转录引物及miRNA检测方法在审
| 申请号： | 201911241240.X | 申请日： | 2016-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN110804656A | 公开（公告）日： | 2020-02-18 |
| 发明（设计）人： | 陈伟铭;康诗婷 | 申请（专利权）人： | 奎克生技光电股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京同立钧成知识产权代理有限公司 11205 | 代理人： | 罗英;臧建明 |
| 地址： | 中国台湾新竹科学工业园区*** | 国省代码： | 台湾;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核苷酸 序列 通用 反向 引物 转录 mirna 检测 方法 | ||
1.一种SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，用于设计miRNA qPCR检测所用的正向引物。
2.一种SEQ ID NO:2所示的通用反向引物，用于在miRNA qPCR检测中进行cDNA分子扩增。
3.根据权利要求2所述的SEQ ID NO:2所示的通用反向引物，其中所述通用反向引物的Tm值为5551℃。
4.一种通用反转录引物，用于对待测miRNA进行cDNA合成，所述通用反转录引物为以下方通式表示的核苷酸序列：
R-(dT)nVN
其中R为5’端的核苷酸序列且为SEQ ID NO:2，(dT)n为中间部分n个连续的胸腺嘧啶残基，n为15，VN为3’端由核苷酸残基组成的序列，V为腺嘌呤残基、鸟粪嘌呤残基或胞嘧啶残基，N为腺嘌呤残基、鸟粪嘌呤残基、胞嘧啶残基或胸腺嘧啶残基。
5.一种miRNA检测方法，包括：
对样品中的待测miRNA添加poly-A尾；
利用通用反转录引物对所述待测miRNA进行cDNA合成；以及
进行cDNA分子扩增，其中利用根据权利要求1所述的SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列设计的正向引物与根据权利要求2所述的SEQ ID NO:2所示的通用反向引物，或利用根据权利要求1所述的SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列设计的正向引物与根据权利要求2所述的SEQID NO:2所示的通用反向引物设计的反向引物，
其中所述通用反转录引物为以下方通式表示的核苷酸序列：
R-(dT)nVN
其中R为5’端的核苷酸序列且为SEQ ID NO:2，(dT)n为中间部分n个连续的胸腺嘧啶残基，n为15，VN为3’端由核苷酸残基组成的序列，V为腺嘌呤残基、鸟粪嘌呤残基或胞嘧啶残基，N为腺嘌呤残基、鸟粪嘌呤残基、胞嘧啶残基或胸腺嘧啶残基。
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