[发明专利]一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法在审
| 申请号： | 201911243983.0 | 申请日： | 2019-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN111172308A | 公开（公告）日： | 2020-05-19 |
| 发明（设计）人： | 左示敏;冯志明;张亚芳;陈宗祥;邹捷;崔傲;李明友;杜海波;潘学彪 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 吴爽;徐冬涛 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 s6rnai 基因 抗黑条矮缩病 水稻 品系 wlj1 us6 11 检测 方法 | ||
1.一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，其特征在于，利用转化体WLJ1-US6-11-5中含外源基因S6RNAi的T-DNA表达框在水稻染色体上插入片段序列和插入片段RB端旁侧序列SEQ ID NO: 1，并基于SEQ ID NO: 1序列，建立特异性PCR扩增引物；再利用特异性PCR扩增引物进行检测。
2.根据权利要求1所述的一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，其特征在于，所述特异性PCR扩增引物包括：
正向载体引物US-W1: 5'-CTTAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTT-3'；
反向基因组引物US-W2: 5'-GGTCGAACGAATCAAACATTTTAATAGC-3'；
正向基因组引物US-W3: 5'-CAGCAGGTTTCAGCCTTGGTTCT-3'。
3.根据权利要求2所述的一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，其特征在于，
所述正向载体引物US-W1为依据SEQ ID NO: 1中1-1178位序列设计的正向载体引物；
所述反向基因组引物US-W2为依据SEQ ID NO: 1中1179-2000位序列设计的反向基因组引物；
所述正向基因组引物US-W3为依据T-DNA插入位置上游528bp处设计的正向基因组引物；
所述正向载体引物US-W1和反向基因组引物US-W2组合得引物组合M，扩增出的条带大小为405bp的405bp条带；正向基因组引物US-W3 和反向基因组引物US-W2组合得引物组合N，扩增出的条带大小为903bp的903bp条带；
用引物组合M和引物组合N分别扩增水稻基因组DNA：如果只扩增出所述405bp条带，则表示该植株为含外源S6RNAi基因的纯合体；如果同时能扩增出所述405bp条带和所述903bp条带，则表示该植株为含外源S6RNAi基因的杂合体；如果只扩增出所述903bp条带，则表示该植株不含外源S6RNAi基因。
4.根据权利要求2所述的一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：模板DNA 2.0μL、10×PCR Buffer 2.0μL、dNTP0.4μL、正向引物 0.4μL、反向引物 0.4μL、Taq酶0.2μL、加ddH2O至20μL。
5.根据权利要求2所述的一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，其特征在于，PCR扩增条件为：94℃预变性3min；94℃变性45S，58℃退火45S，72℃延伸1min，38个循环；72℃延伸5min。
6.一种用于水稻品系WLJ1-US6-11-5纯杂合鉴定的试剂盒，包括权利要求2所述的特异性PCR扩增引物。
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