[发明专利]一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法

说明书

本发明公开了一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1‑US6‑11‑5的检测方法，属于生物技术领域。本发明是利用转化体WLJ1‑US6‑11‑5中含外源基因S6RNAi的T‑DNA表达框在水稻染色体上插入片段序列和插入片段RB端旁侧特异序列SEQ ID NO:1，并基于SEQ ID NO:1序列，建立的特异性PCR扩增鉴定技术。PCR所用正向载体引物US‑W1依据SEQ ID NO:1中1‑1178位序列设计，反向基因组引物US‑W2依据SEQ ID NO:1中1179‑2000位序列设计，正向基因组引物US‑W3依据T‑DNA插入位置上游528bp处设计。根据是否扩增得到US‑W1 US‑W2引物组合M、US‑W3 US‑W2引物组合N的目标片段判断株系中是否含外源S6RNAi基因，该PCR方法可作为鉴定转基因水稻品系WLJ1‑US6‑11‑5及该品系的衍生系的有效手段。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及鉴定S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5及其衍生品系的检测方法及其所依赖的转化体特异序列。

背景技术

水稻是世界主要粮食作物之一，是世界上近一半以稻米为主食的人口的主要粮食作物。水稻也是我国最为重要的粮食作物之一，水稻在生产上的安全与否对于保障我国粮食生产安全起着非常重要的作用。水稻病害是影响我国实现水稻稳产、高产、优产目标的重要因素之一。水稻黑条矮缩病是通过灰飞虱作为其主要传播媒介的一种水稻病毒病，它是由水稻黑条矮缩病毒引起。水稻一旦受该病毒侵染后，基本无法防治，因此黑条矮缩病也被称为水稻上的“癌症”，严重发生时可造成巨大的产量损失。由于缺乏高抗资源和高效的抗病鉴定方法，使得通过传统育种手段难以培育高抗病品种。以转基因技术为核心的分子育种设计技术可以将水稻自身携带的抗性基因以及其他物种的抗性基因导入水稻中，在水稻中过量表达，从而使现有品种获得高抗病特性。目前已经有多个转基因水稻品系获准进入环境释放或生产试验。对转基因作物的有效监管是转基因作物安全利用的重要保障。转基因作物外源序列插入片段旁侧序列是转基因植物品系的最重要的分子身份证。因此，依据外源插入片段的旁侧序列是建立转基因作物品系特异性检测方法的重要技术资料。

WLJ1-US6-11-5是江苏省扬州大学研发的抗水稻黑条矮缩病的具有广泛应用前景的转基因水稻品系[邹捷，抗黑条矮缩病转基因水稻育种新材料的创制(D)，扬州大学，2016]。利用插入位点旁侧序列特异性地鉴定转基因品种(品系)是目前鉴定转基因作物最可靠最特异的检测方法，是准确鉴别区分同一转化体及其衍生品系的方法。

利用插入位点旁侧序列鉴定转基因品系，该方法己在鉴定Bt汕优63、克螟稻、科丰8号和科丰6号品系中建立。WLJ1-US6-11-5是最新研发的抗黑条矮缩病转基因水稻品系，尚无任何相关转基因水稻WLJ1-US6-11-5外源基因插入片段的旁侧序列文章报道和专利。

发明内容

针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，以提高区分同一转化体及其衍生品系的鉴别准确度。

为实现以上技术目的，本发明利用插入位点旁侧序列特异性地鉴定转基因品种(品系)是目前鉴定转基因作物最可靠最特异的检测方法，采用的具体技术方案如下。

一种转S6RNAi基因抗黑条矮缩病水稻品系WLJ1-US6-11-5的检测方法，利用转化体WLJ1-US6-11-5中含外源基因S6RNAi的T-DNA表达框在水稻染色体上插入片段序列和插入片段RB端旁侧序列SEQ ID NO:1，并基于SEQ ID NO:1序列，建立特异性PCR扩增引物；再利用特异性PCR扩增引物进行检测。

所述特异性PCR扩增引物包括：

正向载体引物US-W1:5'-CTTAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAGTT-3'；