[发明专利]一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法

权利要求书

1.一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于，所述方法包括：联合调控猪克隆胚胎的组蛋白泛素化和组蛋白H3第9位赖氨酸上三甲基化(H3K9me3)和组蛋白H3第4位赖氨酸上三甲基化(H3K4me3)的修饰程度；所述联合调控指同时降低组蛋白泛素化、H3K9me3和H3K4me3的修饰程度；所述降低组蛋白泛素化修饰程度通过过表达去泛素化酶USP29基因实现；所述降低组蛋白H3K9me3和H3K4me3修饰程度，通过过表达组蛋白H3K9me3去甲基化酶KDM4A基因和组蛋白H3K4me3去甲基化酶KDM5B基因实现；

所述方法的操作包括以下步骤：

S1、获得克隆胚；

S2、获得外源mRNA；所述外源mRNA指USP29基因的mRNA、KDM4A基因的mRNA和KDM5B 基因的mRNA；具体方法包括：分别构建USP29、KDM4A和KDM5B基因的过表达载体；分别体外转录合成USP29、KDM4A和KDM5B基因的mRNA；

S3、将外源mRNA导入克隆胚；所述外源mRNA浓度为100～1000 ng/μl，导入量为每个克隆胚导入10～50 pl；外源mRNA导入时机是在克隆胚胎电融合激活后4～6小时；

S4、将导入了外源mRNA的克隆胚移植入受体母猪，使其自然发育。

2.根据权利要求1所述的提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于：在S3步骤中，所述外源mRNA的浓度为500 ng/μl。

3. 根据权利要求1所述的提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于：在S3步骤中，所述外源mRNA的导入量为每个克隆胚导入10 pl。

4.根据权利要求1所述的提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于，所述外源mRNA中USP29、KDM4A和KDM5B基因的mRNA的体积比为1:1:1。