[发明专利]一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法

权利要求书

1.一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)重组鸡干扰素α复性液预处理：调节所述重组鸡干扰素α复性液原液pH至2.8-3.2，用35-50倍重组鸡干扰素α复性液体积、浓度为15-25mM的磷酸盐缓冲液，使用截留分子量为7KD的透析袋透析12-18h，经离心弃沉淀，得上清；

(2)阳离子交换层析：①平衡:阳离子柱子用0.015M-0.025M磷酸盐缓冲液平衡；②上样:将所述步骤(1)的上清进行上样；③淋洗：0.015M-0.025M磷酸盐缓冲液淋洗平衡；④洗脱：用浓度为0.5M-1M NaCl、0.015M-0.025M磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集洗脱液；

(3)镍柱亲和层析：①平衡：将镍-琼脂糖凝胶FF柱用20mM PBS进行平衡；②上样：将阳离子交换层析洗脱液调节PH至6.5-7.5，然后将所述步骤(2)-④的洗脱液进行上样；③再平衡：用20mM PBS进行再平衡；④洗脱：用6.5-7.5，浓度为500mM咪唑，以50-100μg/mL的流速进行洗脱，收集洗脱液，得到重组鸡干扰素α纯化品。

2.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述磷酸盐缓冲液的pH 2.8-3.2。

3.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，磷酸盐缓冲液体积为重组鸡干扰素α复性液体积的40倍，透析时间12-16h。

4.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(2)①平衡、③淋洗、④洗脱中，磷酸盐缓冲液pH为6.0。

5.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(2)-①中，所述平衡具体为:阳离子柱子用0.02M,pH6.0磷酸盐缓冲液平衡3-4个柱体积；

所述步骤(2)-③中，所述淋洗具体为：0.02M,pH6.0磷酸盐缓冲液淋洗脱3-4个柱体积；

所述步骤(2)-④中，用浓度为1M NaCl、0.02M,pH6.0磷酸盐缓冲液。

6.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(2)-④中，所述洗脱的流速为80-120μg/mL。

7.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述PBS组成为：20mM NaH₂PO₄，20mM咪唑，0.5M NaCl，pH7.0-7.5。

8.如权利要求1所述的一种从重组鸡干扰素α复性液中纯化制备重组鸡干扰素α的方法，其特征在于：所述步骤(3)-④中，洗脱液为PH 7.0，浓度500mM咪唑，洗脱速度为100μg/mL。

9.由权利要求1-8任一所述方法制备获得的重组鸡干扰素α纯化品。