[发明专利]液相色谱串联质谱定量意蜂蜜MRJP2的方法在审
| 申请号： | 201911260274.3 | 申请日： | 2019-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN110850000A | 公开（公告）日： | 2020-02-28 |
| 发明（设计）人： | 杨术鹏;李熠;周金慧;丛晓蕾;张金震;金钥;杨宇辉;黄京平;袁媛;赵文 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 100093*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 色谱 串联 定量 蜂蜜 mrjp2 方法 | ||
1.液相色谱串联质谱定量意蜂蜜MRJP2的方法，其特征在于，所述方法包括质谱法检测意蜂蜜中MRJP2的特征肽段，含有以下特征肽段：
特征肽段1：IVNDDFNFDDVNFR；
特征肽段2：GDALIVYQNADDSFHR。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对蜂蜜样品进行前处理的步骤，前处理使用的试剂包括：
(1)提取缓冲液：0.01 M PBS，pH7.4；
(2)胰蛋白酶液20 ng/μL，溶剂为40mM碳酸氢氨溶液；
(3)特征肽段1、2的标准品。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、配制含有固定浓度的稳定同位素内标肽段的不同浓度的特征肽段标准品溶液，进入质谱检测并绘制标准曲线；
B、待测蜂蜜样品的前处理：提取蜂蜜中的蛋白质，用胰蛋白酶液对样品蛋白进行酶切，对酶解产物除盐；
C、向待测样本中添加稳定同位素内标肽段使其浓度与步骤A中的浓度相同，采用相同方法进行液相色谱串联质谱检测；
D、对照标准曲线，获得待测样本中特征肽段的浓度，从而实现对MRJP2的定量检测。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤A和C中采用三重四级杆或Q Exactiveplus液质联用仪进行液相色谱串联质谱检测。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述特征肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子具有865.39446的质荷比；子离子包含质荷比为1026.46125、1517.62597的子离子。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述稳定同位素内标肽段为：IVNDDFNFDDVNFR*，其中，R*表示精氨酸中的碳置换为13C6，氮置换为15N；
所述稳定同位素内标肽段在质谱中所产生的检测信号的母离子具有870.39862的质荷比；子离子包含质荷比为1036.47473、1527.63977的子离子。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤A得到的标准曲线为Y=0.007651X+0.01499，R2=0.9987，其中，Y为特征肽段/稳定同位素内标肽段的峰面积比，X为特征肽段的浓度。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，MRJP2的线性检测范围为10-1000 ng/mL，最低检出限为10 ng/mL。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院蜜蜂研究所，未经中国农业科学院蜜蜂研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201911260274.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
