[发明专利]一种传染性支气管炎病毒rH120-YZS1Δ5a及其构建方法和应用有效
申请号: | 201911264929.4 | 申请日: | 2019-12-11 |
公开(公告)号: | CN110904056B | 公开(公告)日: | 2021-10-08 |
发明(设计)人: | 周生;唐梦君;程旭;姜逸;俞燕;赵秀美;高明艳;韦玉勇 | 申请(专利权)人: | 江苏省家禽科学研究所 |
主分类号: | C12N7/00 | 分类号: | C12N7/00;C12N15/86;C12N15/66;C07K14/165;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 吕纪涛 |
地址: | 225125 江苏省扬州市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 传染性 支气管炎 病毒 rh120 yzs1 及其 构建 方法 应用 | ||
本发明提供了一种传染性支气管炎病毒rH120‑YZS1Δ5a及其构建方法和应用,属于分子生物学和基因工程技术领域,所述传染性支气管炎病毒rH120‑YZS1Δ5a保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC No.10499。采用本发明提供的传染性支气管炎病毒能够同时表达QX型和Mass型鸡传染性支气管炎病毒的S1蛋白,进而可用于制备预防鸡传染性支气管炎的双价疫苗。
技术领域
本发明属于分子生物学和基因工程技术领域,尤其涉及一种传染性支气管炎病毒rH120-YZS1Δ5a及其构建方法和应用。
背景技术
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为冠状病毒科冠状病毒属的代表种,其基因组为单股正链RNA,长约27.6kb,至少有10个明显的开放阅读框(ORF),分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白,现已确定的ORF的定位次序是5′1ab-S-3ab-E-M-5ab-N-3′。3ab和5ab均为病毒编码的非结构蛋白,在IBV感染细胞内均可检测到,但其功能目前尚不清楚。已有研究表明3ab、5ab编码区的缺失并不影响IBV的复制和病毒的致病性[Casais R,Davies M,CavanaghD,et al.Gene 5ofthe avian coronavirus infectious bronchitis virus is notessential forreplication.JVirol,2005,79(13):8065-8078.]。
随着冠状病毒反向遗传操作技术的日趋成熟,构建以冠状病毒为载体的表达系统成为近几年研究的热点之一[Enjuanes L,Sola I,Alonso S,et al.Coronavirus reversegenetics and development of vectors for gene expression.Curr Top MicrobiolImmunol.2005.287:161-97.]。以冠状病毒为活载体的表达系统主要具有以下几个优点:1)冠状病毒的基因组全长27~31kb,是目前已知RNA病毒中基因组最大的一类病毒,作为载体可以容纳不少于6kb以上的外源基因,因此可以用来构建多基因共表达系统;2)具有独特的转录机制,可以简单的通过引入转录调控序列(TRS)的方法表达外源基因;3)其基因组为单股正链RNA,基因复制定位于细胞质中,因此不会整合到宿主细胞染色体中;4)粘膜是冠状病毒感染的自然途径,以该病毒为载体研制的重组疫苗能够诱导机体产生粘膜免疫。
现有技术中建立了IBV H120疫苗株的反向遗传操作系统[周生,戴亚斌,唐梦君等.鸡传染性支气管炎病毒H120疫苗株全长cDNA感染性克隆的构建.中国家禽,2010,32(23):22-26.]。为了研究IBV的载体特性,首先采用绿色荧光蛋白(EGFP)基因替换H120株病毒基因组中的5a基因编码区,成功拯救获得重组病毒H120-5a/EGFP[周生,唐梦君,戴亚斌等.表达绿色荧光蛋白的重组鸡传染性支气管炎病毒的构建.病毒学报,2011,(01):11-17.]。重组病毒H120-5a/EGFP能在鸡胚中有效的复制和传代,并在感染鸡胚的绒毛尿囊膜、羊膜等组织中表达绿色荧光蛋白。
申请号为CN201310660009.0的中国发明专利公开了一种鸡传染性支气管炎病毒致弱株rH120-YZ及其构建方法,申请号为CN201310196897.5的中国发明专利公开了一种适于细胞培养的嵌合IBV H120 S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用,申请号为CN201310573277.9的中国发明专利公开了一种嵌合IBV4/91株纤突蛋白膜外区基因片段的重组传染性支气管炎病毒及其构建方法和应用。它们的共同之处是以传染性支气管炎病毒H120疫苗株或Beaudette株基因组为骨架,采用分离株的S或S1基因替换对应的区域,拯救获得的是嵌合病毒株,但是均只能表达一种基因类型的S或S1基因。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种传染性支气管炎病毒rH120-YZS1Δ5a及其构建方法和应用,采用本发明提供的传染性支气管炎病毒能够同时表达QX型和Mass型鸡传染性支气管炎病毒的S1蛋白,进而可用于制备预防鸡传染性支气管炎的双价疫苗。
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