[发明专利]一种利用TCPP联合CEP探针鉴定循环肿瘤细胞的试剂盒及应用

说明书

本发明属于肿瘤学和医学检验领域，涉及一种利用TCPP联合CEP探针鉴定循环肿瘤细胞的试剂盒及应用。所述试剂盒包括：TCPP储备液、微酸性缓冲液、细胞清洗液、细胞固定液、组织固定液、CEP探针溶液、细胞破膜液、DAPI染色液、PBS。所述试剂盒应用用于非疾病诊断和治疗目的，所述试剂盒鉴定循环肿瘤细胞的方法包括固相染色法或液相染色法。本发明不依赖于肿瘤细胞表面的抗原表达做为检测手段，避免由于肿瘤细胞在EMT过程中由于抗原丢失而造成某些现有依赖于抗原的检测手段检测出现假阴性，且可以鉴定多种上皮肿瘤，避免了不同种类肿瘤细胞的异质性而没有统一的瘤标来鉴定循环肿瘤细胞的缺陷。

技术领域

本发明涉及肿瘤学和医学检验领域，具体涉及一种利用TCPP联合CEP探针从人的离体样本中检测鉴定循环肿瘤细胞的试剂盒及应用。

背景技术

随着医疗技术的不断发展，越来越多的恶性肿瘤得以有效控制甚至治愈。但仍有很大一部分肿瘤患者愈后较差，这对恶性肿瘤的早期诊断、预后监测提出了更高的要求。由于起病隐匿、早期无明显症状、容易复发及转移等因素，近年来，循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)检测作为一种新型肿瘤诊断及监测手段而受到越来越多的关注。循环肿瘤细胞目前已被证实其计数的动态变化与多种实体肿瘤的疗效、复发、转移等具有一定相关性。循环肿瘤细胞是指从肿瘤原发灶、转移灶或其他不明部位自发脱落或因诊疗操作脱落，通过血管或淋巴系统进入血液循环的肿瘤细胞的统称。少数循环肿瘤细胞能逃避机体的免疫杀伤，随血流播散至远端器官后形成转移灶。因此，循环肿瘤细胞的出现被认为是恶性肿瘤血行转移的重要始发事件。外周血循环肿瘤细胞仅占外周血白细胞的1/10⁷～1/10⁶，且入血呈现不连续性并具有很强的异质性，因此循环肿瘤细胞的检测技术一直是研究的重点和难点。

循环肿瘤细胞的检测主要包括循环肿瘤细胞富集技术和鉴定技术。基于循环肿瘤细胞密度、大小、电荷和可变形性等物理特性诞生了各类富集方法。目前应用最广泛的循环肿瘤细胞富集方法是基于细胞表面标志富集法，其中获得FDA(Foodand DrugAdministration，美国食品和药品管理局)认证的CellSearch检测系统在很多与癌症相关的临床研究中被作为金标准，该系统使用包被上皮细胞黏附分子(Epithelial CellAdhesion Molecule，EpCAM)抗体的免疫磁珠对7.5mL外周血中的循环肿瘤细胞进行富集和计数。富集分离后的循环肿瘤细胞需进一步鉴定，目前采用RT-PCR、免疫荧光标记、RNA原位杂交、染色体核型鉴定等多种技术可对循环肿瘤细胞进行细胞形态学、免疫学、分子学等的检测鉴定，从而实现对外周血循环肿瘤细胞的定性及定量分析。CellSearch法使用表皮细胞特异性蛋白作为肿瘤标志物，同时利用免疫磁珠的方法将循环肿瘤细胞富集并最后进行免疫荧光显微观察检测的一种半自动的循环肿瘤细胞计数方法。这种方法存在检测阳性符合率较低的问题。同时由于其系统较为昂贵、单个检测样本成本较高、耗时较长，应用较为困难。

中国专利申请号2018111914921，专利名称为一种循环肿瘤细胞的检测方法的申请案公开了一种利用Apoptin蛋白在正常细胞和肿瘤细胞的定位特点，结合荧光物质的可视性，将Apoptin基因和荧光蛋白基因融合在起，表达出带有荧光的Apoptin蛋白，并根据Apoptin蛋白在肿瘤细胞和正常细胞核内的定位特点，应用到循环肿瘤细胞的检测的方法，并成功检测到循环肿瘤细胞。但该方法在应用于检测循环肿瘤细胞染色体多倍体，遇到基因断裂或基因融合等情况时，由于捕获的循环肿瘤细胞中存在大量的血细胞背景，寻找目标循环肿瘤细胞极为困难。